人成牙本質(zhì)樣細胞L型鈣離子通道α-,1-亞基D亞型特異性基因的克隆.pdf

1、牙本質(zhì)是構(gòu)成牙齒的主體，在生理情況下只有礦化過程，不存在類似于骨組織的吸收和改建過程，牙本質(zhì)的形成細胞——成牙本質(zhì)細胞具有終身形成牙本質(zhì)的能力，也是牙本質(zhì)發(fā)生損傷，齲損時的修復(fù)細胞。因此，以成牙本質(zhì)細胞為研究對象，可以直觀的反映牙本質(zhì)的形成和修復(fù)機制，并在一定程度上可以反映人類礦化細胞在組織礦化過程中的作用機制。 成牙本質(zhì)細胞是位于牙髓組織外周的高柱狀細胞，來源于外胚間充質(zhì)細胞。成牙本質(zhì)細胞具有分泌和合成所有牙本質(zhì)基質(zhì)成分的功能

2、，在牙本質(zhì)的形成過程中起重要的作用。同時成牙本質(zhì)細胞還具有礦化的功能，但礦化所需的鈣離子是怎樣到達礦化前沿?這種鈣離子的轉(zhuǎn)運是怎樣調(diào)控的?1988年LundgrenT等首次發(fā)現(xiàn)小鼠成牙本質(zhì)細胞膜和線粒體內(nèi)膜上有鈣離子通道，此后學(xué)者們開始對牙齒尤其是成牙本質(zhì)細胞中的鈣離子通道進行研究，但到目前為止，關(guān)于這方面的研究報道還很少。 本研究首先從人成牙本質(zhì)樣細胞中克隆出L型鈣離子通道α1亞基D亞型的特異性基因，并對其進行測序鑒定，經(jīng)與已

3、登錄的人L型鈣離子通道α1亞基D亞型基因序列比對，證實克隆出的基因片段為人成牙本質(zhì)樣細胞L型鈣離子通道α1亞基D亞型的特異性基因；隨后構(gòu)建了該特異性基因的原核表達載體，將重組載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細胞，表達出人成牙本質(zhì)樣細胞L型鈣離子通道α1亞基D亞型特異性蛋白，對目的蛋白進行純化用于多克隆抗體的制備；用純化的目的蛋白免疫小鼠，制備了人成牙本質(zhì)樣細胞L型鈣離子通道α1亞基D亞型多克隆抗體，并對抗體的效價和特異性進行了檢測，證實該多克隆抗