鈣庫(kù)調(diào)控鈣離子通道特異分子的篩選及其相關(guān)特性的研究.pdf

1、鈣庫(kù)調(diào)控鈣離子通道(store-operated calcium channel,SOC)是一種在多種細(xì)胞中存在的鈣離子通道。其基本的門控機(jī)制是當(dāng)胞內(nèi)鈣庫(kù)逐漸排空時(shí),位于鈣庫(kù)膜上的信號(hào)分子STIM1(stromal interaction moleculel)將會(huì)聚集并與細(xì)胞膜上的SOC通道蛋白Orail相互結(jié)合,改變其構(gòu)象并打開(kāi)通道。SOC通道可以調(diào)控許多生理功能,比如可以調(diào)控一些基因的轉(zhuǎn)錄、胞內(nèi)某些酶的活性以及細(xì)胞的胞吐作用等等。同

2、時(shí),SOC通道功能的異常也與一些疾病相關(guān),比如重癥聯(lián)合免疫缺陷綜合癥等。而目前由于已知的SOC通道的拮抗劑和激動(dòng)劑數(shù)量有限,且基本上都沒(méi)有特異性,使得人們對(duì)SOC通道的深入了解受到了阻礙。
　　 本論文針對(duì)這一點(diǎn)利用果蠅S2細(xì)胞,應(yīng)用胞內(nèi)熒光強(qiáng)度檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)方法構(gòu)建了SOC通道特異分子的篩選模型,并利用該模型對(duì)部分從中草藥中提取的小分子化合物進(jìn)行篩選。經(jīng)反復(fù)驗(yàn)證,最終得到了一個(gè)有拮抗效果的小分子科羅索酸,并初步研究了科羅索酸對(duì)SO

3、C的拮抗機(jī)制。
　　 1.SOC通道特異分子篩選模型的構(gòu)建
　　 選擇果蠅S2細(xì)胞作為SOC通道特異分子篩選的細(xì)胞模型。經(jīng)摸索,發(fā)現(xiàn)25℃、無(wú)CO2的培養(yǎng)條件是較適宜S2細(xì)胞生長(zhǎng)的條件。在該培養(yǎng)條件下,應(yīng)用SOC通道激動(dòng)劑TG、胞內(nèi)鈣探針Fluo-4AM以及FlexStation細(xì)胞內(nèi)鈣檢測(cè)的技術(shù),構(gòu)建了SOC通道特異分子篩選的基本細(xì)胞模型,并利用該模型對(duì)三種已知的鈣通道拮抗劑Gd3+、SKF-96365和2APB進(jìn)行測(cè)

4、試。結(jié)果顯示,基本模型能夠很好地檢測(cè)出這三種拮抗劑對(duì)SOC通道的作用特性及效果,表明基本細(xì)胞模型是可靠、穩(wěn)定的;為后續(xù)的藥物篩選實(shí)驗(yàn)打下了基礎(chǔ)。
　　 2.天然提取化合物的篩選及活性化合物的作用機(jī)理初探
　　 應(yīng)用所構(gòu)建的SOC通道特異分子的篩選模型,對(duì)本所從中草藥中所分離出的小分子化合物進(jìn)行篩選。經(jīng)驗(yàn)證,最終得到了一個(gè)對(duì)SOC通道有拮抗效果的小分子化合物科羅索酸。之后,我們對(duì)科羅索酸的拮抗機(jī)理進(jìn)行了探索,發(fā)現(xiàn)科羅索酸能