積雪草酸對抗谷氨酸誘導(dǎo)的興奮性神經(jīng)毒性及其作用機制.pdf

1、目的:研究積雪草酸(asiatic acid,AA)能否對抗谷氨酸(glutamate,Glu)誘導(dǎo)的興奮性神經(jīng)損傷,探討其可能的作用機制。構(gòu)建誘導(dǎo)新型帕金森病(Parkinson'sdisease,PD)模型的慢病毒載體,為研究AA的抗PD作用奠定基礎(chǔ)。
　　 方法:AA作用于Glu損傷的人神經(jīng)母細胞瘤細胞(SH-SY5Y)上,MTT法檢測AA對抗Glu損傷的作用:Hoechst33342染色觀察細胞核變化；Annexin-V

2、／PI雙染檢測細胞凋亡率；分光光度計法檢測細胞內(nèi)GSH含量和SOD活性；DCFH—DA染色檢測活性氧(ROS)生成；檢測AA對線粒體腫脹的影響以確定其與線粒體之間的相互作用；JC-1染色檢測線粒體膜電位；western blot檢測Bcl-2、Bax、PGC-1α和Sirtl蛋白表達量；用谷氨酸鈉(monosodium glutamate,MSG)誘導(dǎo)的小鼠認知障礙模型來評價AA的在體抗興奮性毒性作用；in—fusion法構(gòu)建突觸核蛋白

3、(α-synuclein)核定位和胞漿定位慢病毒質(zhì)粒并轉(zhuǎn)染293FT細胞。
　　 結(jié)果:細胞模型上,通過MTT檢測,預(yù)先給予0.1-100 nM AA能對抗10 mM Glu所產(chǎn)生的損傷。首先AA抑制Glu誘導(dǎo)的細胞核皺縮和凋亡。其次,AA能夠清除Glu引起的細胞內(nèi)ROS的增加,提高GSH含量和SOD活性。并且提高線粒體膜電位、對抗線粒體腫脹。另外可以提高PGC-1α和Sirtl的表達同時對Bcl-2和Bax的表達影響不大。在體