谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體GLAST在小鼠視網(wǎng)膜興奮性損傷后的表達(dá).pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)在NMDA(N-甲基-D天門冬氨酸)所致小鼠視網(wǎng)膜興奮性損傷中,觀察谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體GLAST的蛋白表達(dá)量和mRNA隨時(shí)間表達(dá)量的變化,探討GLAST對(duì)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡的作用。
　　 方法:本實(shí)驗(yàn)采用健康清潔級(jí)4-8周齡C57BL/6J小鼠共54只,雌雄各半,體重約20-30g,隨機(jī)分成A、B、C三組,A組6只為正常對(duì)照組,B、C為實(shí)驗(yàn)組各24只,其中B組為NMDA興奮性損傷組,C組為空白對(duì)照組。B組、C組于造模后6h、2

2、4h、3d和7d四個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死。處死前對(duì)每組小鼠進(jìn)行暗適應(yīng),至少暗適應(yīng)6小時(shí),然后進(jìn)行視網(wǎng)膜電生理(ERG)檢查。ERG操作完畢處死動(dòng)物,取每只小鼠左眼眼球做病理切片,進(jìn)行HE染色、免疫組織化學(xué)及TUNEL凋亡細(xì)胞染色,右眼眼球取完整視網(wǎng)膜用Taqman熒光定量RT-PCR法檢測視網(wǎng)膜中谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體GLASTmRNA隨時(shí)間表達(dá)變化,以及與正常組比較表達(dá)差異。
　　 結(jié)果1、HE染色:(1) NMDA興奮性損傷組:造模后6h,與正

3、常對(duì)照組比較未見明顯差異,造模后24h,視網(wǎng)膜的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層開始出現(xiàn)凋亡形態(tài)細(xì)胞,3d凋亡細(xì)胞增多并且神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)目逐漸減少,7d興奮性損傷組神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的數(shù)目更少,而且內(nèi)叢狀層變薄,與正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(2) PBS空白對(duì)照組:與正常對(duì)照組比較四個(gè)時(shí)間點(diǎn)均未見明顯異常,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 2、視網(wǎng)膜電生理(ERG)檢查:造模后3、7天,(1)NMDA實(shí)驗(yàn)組:與正常對(duì)照組比較,在標(biāo)準(zhǔn)

4、混合反應(yīng)中b波波幅顯著下降,差異顯著有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(2) PBS空白對(duì)照組:與正常組比較沒有明顯差異(P＞0.05)。
　　 3、TUNEL凋亡細(xì)胞染色:(1) NMDA實(shí)驗(yàn)組:四組神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層都可以見到紅染的凋亡細(xì)胞,24h組凋亡細(xì)胞數(shù)量最多,與正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(2) PBS空白對(duì)照組:偶見少量凋亡細(xì)胞,與正常組比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 4、免疫組織化學(xué):三組中

5、都能見到GLAST蛋白的表達(dá),正常組與PBS組可見GALST蛋白分布在視網(wǎng)膜全層,且主要分布在內(nèi)外叢狀層。NMDA組:四個(gè)時(shí)間點(diǎn)GLAST蛋白表達(dá)都明顯減少。3、7d組能見到GALST蛋白在內(nèi)叢狀層、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層的濃度要明顯高于其他各層。
　　 5、Taqman法熒光定量RT-PCR:(1)NMDA組:與正常組比較GLAST的mRNA表達(dá)顯著下調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(2) PBS組:與正常組比較未見明顯差別。<