豚鼠耳蝸谷氨酸—谷氨酰胺循環(huán)中谷氨酰胺轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)及功能研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)一：豚鼠耳蝸中谷氨酰胺轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá) 目的：檢測(cè)谷氨酰胺轉(zhuǎn)運(yùn)體ASCT2、LAT1、LAT2、SN1、ATA1及ATA2在耳蝸中的表達(dá)，探討谷氨酰胺從支持細(xì)胞進(jìn)入內(nèi)毛細(xì)胞的機(jī)制，從而為進(jìn)一步研究耳蝸中的谷氨酸-谷氨酰胺循環(huán)機(jī)制提供分子生物學(xué)基礎(chǔ)。 方法：選取健康白色紅目豚鼠6只，Trizol法提取耳蝸中的總RNA，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)ASCT2、LAT1、LAT2、SN1、ATA1及ATA2在耳蝸中的表達(dá)。

2、結(jié)果：正常豚鼠耳蝸中有ASCT2、LAT1、SN1及ATA1的表達(dá)，其中ASCT2表達(dá)最強(qiáng)，LAT2及ATA2在耳蝸中無表達(dá)。 結(jié)論：豚鼠耳蝸中存在谷氨酰胺轉(zhuǎn)運(yùn)體家族，支持細(xì)胞中的谷氨酰胺可能通過谷氨酰胺轉(zhuǎn)運(yùn)體進(jìn)入內(nèi)毛細(xì)胞中；同時(shí)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果支持了耳蝸中存在谷氨酸-谷氨酰胺循環(huán)的假說。 目的：應(yīng)用谷氨酰胺轉(zhuǎn)運(yùn)體拮抗劑-組氨酸阻斷谷氨酰胺轉(zhuǎn)運(yùn)體后，觀察耳蝸功能的變化，以了解谷氨酰胺轉(zhuǎn)運(yùn)體在維持耳蝸功能中的作用：并探討組氨酸對(duì)

3、噪聲性聽力損失的保護(hù)作用。 方法：選取健康白色紅目豚鼠60只，隨機(jī)分為6組，每組10只，(1)人工外淋巴液組；(2)10mM組氨酸組，(3)50mM組氨酸組；(4)100mM組氨酸組，(5)人工外淋巴+噪聲組；(6)50mM組氨酸+噪聲組。各組均采用全耳蝸灌流的方法給藥。分別檢測(cè)各組灌流前后CM、CAP，(1)、(5)、(6)組灌流后取右側(cè)耳蝸標(biāo)本作鋪片觀察。 結(jié)果：灌流2小時(shí)后，(1)組CAP閾值升高了3.50±3.3

4、7dB， CAP幅值下降了5.40gV，CM非線性存在。(2)組CAP閾值升高了7.00±4.83dB，CAP幅值平均下降了74.60gV，(3)組CAP閾值升高了8.00±5.86dB，CAP幅值平均下降了71.30μV，(4)組CAP閾值升高了6.50±5.30dB，CAP幅值平均下降了74.10μV；(1)～(4)組兩兩組間比較，CAP閾值變化均無顯著性差異(P>0.05)。(1)組灌流前、后幅值變化無顯著性性差異(P>0.05)

5、，(2)～(4)組灌流前、后幅值變化均有顯著性性差異(P<0.01)。(1)～(4)組灌流前、后，CM非線性特性均存在。(5)組CAP閾值升高了34.50±4.38dB，CM非線性消失；外毛細(xì)胞明顯腫脹，(6)組CAP閾值升高了11.50±5.80dB，(5)、(6)組間比較，CAP閾移有顯著性差異(P<0.01)；(6)組CM幅非線性仍存在；鋪片結(jié)果顯示，(5)組外毛細(xì)胞呈廣泛性腫脹，(6)組外毛細(xì)胞腫脹明顯輕于(5)組外毛細(xì)胞，呈散