鋅轉(zhuǎn)運體8自身抗體(ZnT8A)對中國1型糖尿病的診斷價值研究.pdf

1、本文對鋅轉(zhuǎn)運體8自身抗體（ZnT8A）對中國1型糖尿病的診斷價值進行了研究。本研究分為三個部分：
　　 第一部分：ZnT8A放射配體檢測法的建立與評價。
　　 目的：建立鋅轉(zhuǎn)運體8自身抗體(ZnT8A)的放射配體檢測法(RLA),初步探討其對中國1型糖尿病(T1DM)的診斷價值。
　　 方法：采用重組人ZnT8質(zhì)粒,經(jīng)試管內(nèi)轉(zhuǎn)錄與翻譯,獲得35S-ZnT8抗原,35S-ZnT8與血清在自制旋轉(zhuǎn)孵育器上旋轉(zhuǎn)溫育后,

2、用蛋白A-瓊脂糖沉淀免疫復合物。免疫復合物經(jīng)TBST緩沖液洗滌后,用多功能閃爍發(fā)光分析儀檢測沉淀物放射性計數(shù)值。通過參加由國際糖尿病免疫學會(IDS)和美國疾病預(yù)防控制中心(CDC)聯(lián)合舉辦的第六次糖尿病自身抗體國際標準化評估(DASP2009),評價方法的靈敏度和特異性。并檢測539例1型、555例2型糖尿病患者以及405例正常人ZnT8A水平,初步評價其臨床應(yīng)用價值。
　　 結(jié)果：①該方法批內(nèi)變異系數(shù)3.9％～9.8％,批間

3、變異系數(shù)4.3％～13.8％；DASP2009結(jié)果反饋顯示,該方法靈敏度66％(50例T1DM患者中檢測出陽性33例),特異性100％(100例健康人全檢測出陰性)；②受試者操作特性曲線(ROC)分析顯示,曲線下面積為0.879±0.034,95％可信區(qū)間為0.813～0.945；③該方法陽性閾值ZnT8A指數(shù)為0.011(.405例正常人的99％百分位點)；④檢測T1DM患者陽性率24.1％(130/539),顯著高于2型糖尿病患者的

4、1.1％(6/555)和健康人的0.99％(4/405)(χ2值分別為182.3和98.6,均有P＜0.0001)。
　　 結(jié)論：①建立的RLA法檢測ZnT8A敏感性高、特異性強、重復性好；②ZnT8A在T1DM中陽性率較高,其對中國T1DM的診斷與分型具有實用價值。
　　 第二部分：ZnT8A在1型糖尿病中的分布規(guī)律研究。
　　 目的：探討中國1型糖尿病(T1DM)患者中鋅轉(zhuǎn)運體8自身抗體(ZnT8A)的陽性率

5、及其分布規(guī)律。
　　 方法：采用放射配體檢測法(RLA)檢測539例T1DM患者、555例2型糖尿病(T2DM)患者、405例正常對照血清ZnTSA。T1DM來自1999年10月至2009年12月中南大學湘雅二醫(yī)院門診及住院T1DM患者及湖南省T1DM協(xié)作組,平均診斷年齡24.0歲(1.0～70.0歲),平均病程2月(0～348月),其中男性293例,女性246例。同時采用放射配體法檢測谷氨酸脫羧酶抗體(GADA)、蛋白酪氨酸磷

6、酸酶抗體(IA-2A)。
　　 結(jié)果：①T1DM組ZnT8A陽性率24.1％(130/539)顯著高于T2DM組1.1％(6/555)與正常對照組1.0％(4/405)(均P＜0.001),但在T2DM組與正常對照組之間差異無顯著性(P＞0.05)；②GADA和/或IA-2A陽性T1DM中ZnT8A陽性率31.2％(101/324)顯著高于GADA和IA-2A陰性的T1DM中ZnT8A陽性率13.5％(29/215)(P＜0.0

7、01)；③中國T1DM患者ZnT8A陽性率低于高加索人的61.5％(259/421)(P＜0.001),亦低于德國人陽性率60.0％(122/202)(P＜0.001),但與日本人ZnT8A陽性率27.8％(75/270)相比差異無顯著性(P＞0.05)；④ZnT8A、GADA和IA-2A在T1DM中的陽性檢出率分別為24.1％,53.4％,25.8％,ZnT8A和IA-2A陽性率要顯著低于GADA(P=0.000)。ZnT8A和IA-

8、2A的陽性率相比差異無顯著性(P＞0.05)；⑤ZnT8A、GADA和IA-2A三種抗體同時陽性的占9.5％(51/539),兩兩重疊率最高的為GADA和IA-2A,重疊率為19.1％(103/539),其次為ZnT8A和GADA,重疊率為16.0％(86/539),最后為ZnT8A和IA-2A,重疊率為12.3％(66/539)；⑥ZnT8A、GADA和IA-2A三種抗體聯(lián)合檢測使自身免疫糖尿病的診斷敏感性達65.5％(353/539

9、),在己檢測GADA和IA-2A的基礎(chǔ)上,進一步檢測ZnT8A能將自身免疫陽性率由60.1％提高到65.5％。⑦在兩個抗體“GADA+且IA-2A+組”中ZnTSA陽性率49.5％(51/103),要顯著高于單個抗體“GADA+或IA-2A+組”中ZnT8A陽性率31.2％(101/324)(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：①ZnT8A是T1DM患者一種獨立體液免疫標志物,尤其對GADA和(或)IA-2A陰性的T1DM患者具有診斷

10、價值；②按發(fā)病年齡與病程與國外研究匹配,不同的種族人群中ZnTSA陽性率具有差異性,中國與日本新診T1D患者ZnT8A陽性率相似,要顯著低于高加索人和德國人；③ZnT8A與GADA/IA-2A存在一定重疊率；④GADA和/或IA-2A聯(lián)合ZnT8A檢測能夠提高T1DM的診斷敏感性；⑤在多個抗體陽性的T1DM患者中ZnTSA陽性率更高。
　　 第三部分：ZnT8A與T1DM患者臨床特征的關(guān)系研究。
　　 目的：探討ZnT8

11、A陽性T1DM糖尿病患者的臨床特征
　　 方法：采用放射配體檢測法(RLA)檢測539例T1DM患者ZnT8A,患者來源及特征同第二部分。同時采用放射配體法檢測谷氨酸脫羧酶抗體(GADA)、蛋白酪氨酸磷酸酶抗體(IA-2A),分析ZnT8A陽性T1DM糖尿病患者的臨床特征。
　　 結(jié)果：①ZnT8A在BMI＜21 kg/m2,BMI為21.0～25.0 kg/m2 T1DM中的陽性率分別為24.3％,25.0％,顯著高于

12、BMI＞25.0 kg/m2的陽性率(9.3％),兩者差異均具有顯著性(均P＜0.05)。②ZnT8A在FCP＜150pmol/L時TlDM患者陽性率24.4％與FCP＞250pmol/L時的陽性率31.8％相比差異無顯著性(P＞0.05)。③與ZnT8A陰性組比,ZnT8A陽性患者起病年齡更小,體重指數(shù)更低,血壓更低,餐后2小時C肽更高(P均＜0.05),GADA和IA-2A滴度更高,合并GADA+及IA-2A+比例更高(P均＜0.0

13、01)。④單一ZnT8A陽性組較抗體陰性組病程更長,胰島素用量更大(P均＜0.01),收縮壓更低,合并代謝綜合征比例更少(P均＜0.05)。單一ZnT8A陽性組較單一GADA陽性組有更高的體重指數(shù),更高的腰臀比(P＜0.05),更低的糖化血紅蛋白與更高的空腹C肽(P＜0.05),單一ZnTSA陽性組較單一IA-2A陽性組有更高的體重指數(shù)(P＜0.01)。⑤與抗體陰性組比較,ZnT8A、GADA和IA-2A三個抗體同時陽性患者表現(xiàn)出以下特

14、點:起病年齡更小,體重指數(shù)更小,腰臀比更小,甘油三酯更低,合并代謝綜合征比例更少(P均＜0.01)。⑥ZnT8A指數(shù)水平與IA-2A指數(shù)存在正相關(guān)(γ=0.214,P=0.000),但與GADA指數(shù)無相關(guān)性(γ=0.068,P=0.127)。
　　 結(jié)論：①ZnT8A在體型偏瘦者T1DM的陽性率要高于肥胖者,ZnT8A與胰島功能沒有明顯的相關(guān)性。②ZnT8A陽性患者臨床表現(xiàn)多樣化,難以界定于經(jīng)典T1DM或GADA和IA-2A均陰