表達(dá)干擾素-tv的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療大鼠誘發(fā)性肝癌.pdf

1、第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文表達(dá)干擾素tv的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療大鼠誘發(fā)性肝癌姓名：胡還章申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：外科學(xué)（肝膽外科）指導(dǎo)教師：吳孟超錢其軍20100501第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文消化臍帶組織塊，比較不同消化方法獲得的細(xì)胞總數(shù)與活力。原代hUCMSCs用MesenPRORSTMMedium體系培養(yǎng)、傳代1周后接種于表面積為850cm2的滾瓶，置于INCUDRIVED—IC02培養(yǎng)箱轉(zhuǎn)動系統(tǒng)擴(kuò)增。以MOI=5、20、100加入

2、Ad5／F35IFNtv感染hUCMSCs，收集培養(yǎng)液上清，化學(xué)發(fā)光免疫測定法(CLIA)鋇tJ定IFN，tv的表達(dá)。分別用lpg／mL、10pg／mL、100pg／mL、lng／mL、10ng／mL、100ng／mL的IFNtv蛋白加入對數(shù)生長期的人肝癌細(xì)胞BEL7405，磺酰羅丹明B(SRB)法測定不同濃度的IFNtv蛋白對人肝癌細(xì)胞BEL7405的殺傷作用。結(jié)果：II型膠原酶消化臍帶組織塊，每根臍帶可獲得5x106以上的細(xì)胞數(shù)量，

3、細(xì)胞活率在90％以上。hUCMSCs經(jīng)過2次傳代培養(yǎng)其形態(tài)呈較為均一的梭形，漩渦樣生長，最終可擴(kuò)增至109／N米臍帶。以MOI=5、20、100加入病毒Ad5／F35IFNtv感染hUCMSCs后檢測上清發(fā)現(xiàn)，隨MOI值的增加，IFNtv基因的表達(dá)升高，當(dāng)MOI=100時，IFNtv基因的表達(dá)可接近800ng／mL。將不同濃度的IFNtv蛋白加入BEL7405肝癌細(xì)胞中，SRB法檢測發(fā)現(xiàn)，當(dāng)IFNtv蛋白的濃度為100ng／mL時，對B

4、EL7405的殺傷作用可達(dá)50％以上。結(jié)論：II型膠原酶消化法能較好地從人臍帶組織中分離出間充質(zhì)干細(xì)胞，對細(xì)胞損傷小，培養(yǎng)成功率高。MesenPRORSTMMedium培養(yǎng)基、滾瓶培養(yǎng)系統(tǒng)能夠獲得形態(tài)均一的hUCMSCs和較高的增殖率。感染Ad5／F35一IFNtv的hUCMSCs能大量表達(dá)IFNtv蛋白，對人肝癌細(xì)胞BEL7405具有良好的殺傷活性。關(guān)鍵詞：間充質(zhì)干細(xì)胞，臍帶，膠原酶，基因表達(dá)，細(xì)胞殺傷第三部分hUCMSCsAd5／F

5、35一IFNw治療DEN誘導(dǎo)的大鼠肝癌目的：建立穩(wěn)定的DEN誘發(fā)性大鼠肝癌模型，對hUCMSCsAd5／F35IFNtv治療誘導(dǎo)性大鼠肝癌進(jìn)行初步研究方法：配制9310‘4MDEN濃度的飲用水供35周齡雄性SD大鼠自由飲用8周，建立肝癌模型。計算誘導(dǎo)大鼠死亡率與誘癌成功率。將肝癌模型大鼠分為C組(對照組)、M組(尾靜脈注射hUCMSCs3x106)、1I組、3I組、5I組(分別尾靜脈注射1x106、3x106、5x106hUCMSCsA