ANXA1、COX-2、P16、HPV16-18E6、HPV16E7、Rb蛋白在喉鱗狀細胞癌中的表達及相關(guān)研究.pdf

1、目的:
　　 喉鱗癌(Laryngealsquamouscellcarcinoma，LSCC)在最近幾年的發(fā)病幾率呈現(xiàn)逐年上升趨勢，也是常見的腫瘤之一，占全身其他腫瘤的1～5％，全世界每年大約新增500000人，在我國發(fā)病率是本專業(yè)惡性腫瘤的第三位。近年來隨著生物分子學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，研究發(fā)現(xiàn)許多惡性腫瘤的發(fā)生與各種因素導(dǎo)致抑癌基因的失活和癌基因得到激活有著密切關(guān)系，喉癌的發(fā)生與吸煙、飲酒、人乳頭瘤病毒(humanpapillo

2、mavirus，HPV)感染等多種因素相關(guān)，我們以往的研究也證實了喉癌與高危型人乳頭瘤病毒16型密切相關(guān)，高危型HPV病毒E6、E7基因產(chǎn)物E6和E7蛋白被認(rèn)為是致癌蛋白，許多實驗研究證實了E7蛋白可以通過結(jié)合Rb蛋白，結(jié)合后會使Rb蛋白失去活性，而E6蛋白可以與P53發(fā)生結(jié)合，通過結(jié)合后使P53出現(xiàn)降解，最終導(dǎo)致細胞持續(xù)增殖，細胞周期紊亂，傾向惡性腫瘤方向發(fā)展。雖然關(guān)于診斷和治療都有新的發(fā)展，生存率方面仍然沒有增長的趨勢。膜聯(lián)蛋白1（

3、annexin-1，ANXA1）的表達與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、及抗藥性具有密切的關(guān)系。P16是一種抑制性癌基因，主要是對細胞周期進行負(fù)性調(diào)控，發(fā)揮負(fù)性調(diào)控作用主要是通過抑制CyclinD1/CKD4復(fù)合物的活性發(fā)揮作用。組織細胞周期出現(xiàn)異常會引起細胞持續(xù)無限增殖，細胞永生化，細胞周期紊亂，最后可以引發(fā)組織細胞質(zhì)變形成惡性腫瘤。Rb基因在細胞周期中發(fā)揮重要的調(diào)控作用，特別是在細胞周期G1期，其在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中也越來越引起關(guān)注，Rb基因通過阻

4、滯細胞周期，對細胞的增殖發(fā)揮抑制效應(yīng)。
　　 本實驗應(yīng)用IHC的實驗方法檢測喉鱗狀細胞癌(Laryngealsquamouscellcarcinoma，LSCC)組織中膜聯(lián)蛋白1（annexin-1，ANXA1）、P16、COX-2、HPV16/18E6、HPV16E7、視網(wǎng)膜母細胞瘤(retinoblastoma，Rb)的表達情況，進一步探討在LSCC發(fā)生、發(fā)展中的表達規(guī)律和作用。
　　 方法:
　　 收集20

5、10～2012年我科（鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科）因喉部疾病的手術(shù)標(biāo)本，其中喉癌標(biāo)本56例，聲帶息肉36例，癌周正常組織(距腫瘤＞1.5cm)36例。
　　 56例喉癌患者中，男51例，女性5例，年齡39～84歲，平均年齡為60.55±10.65歲。喉癌的臨床分期和病理學(xué)分級按2002年國際抗癌聯(lián)盟(UICC)標(biāo)準(zhǔn)進行，其中臨床分期Ⅰ期15例，Ⅱ期18例，Ⅲ期14例，Ⅳ期9例;按腫瘤分化程度將其分為3級，其中Ⅰ級（高分

6、化）13例，Ⅱ級（中分化）25例，Ⅲ級（低分化）18例。所有病人術(shù)前未放療和化療。
　　 所有標(biāo)本通過10％福爾馬林溶液固定，石蠟包埋，蠟塊分組建立喉癌多階段生物學(xué)模型:(1)喉癌組(2)聲帶息肉/正常黏膜組;(3)癌周組。采用免疫組織化學(xué)EnVision法檢測組織標(biāo)本中膜聯(lián)蛋白1（annexin-1，ANXA1）、P16、COX-2、HPV16/18E6、HPV16E7、視網(wǎng)膜母細胞瘤(retinoblastoma，Rb)蛋白

7、的表達情況。
　　 對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析，采用x2檢驗，以P＜0.05為有顯著性差異。
　　 結(jié)果:
　　 ①ANXA1在聲帶息肉、癌周組織、喉癌組中的陽性表達率分別為:86.1％、58.3％、42.9％;聲帶息肉、癌周組織、喉癌組相比有顯著性差異(x2=17.019，P＜0.01);P16在聲帶息肉、癌周組織、喉癌組中的陽性表達率分別為:0.2％、38.9％、75％;聲帶息肉、癌周組織、喉癌組相比有顯著性差異(

8、x2=22.211，P＜0.01);COX-2在聲帶息肉、癌周組織、喉癌組中的陽性表達率分別為:86.1％、58.3％、42.9％;聲帶息肉、癌周組織、喉癌組相比有顯著性差異(x2=46.919，P＜0.01);HPV16/18E6在聲帶息肉、癌周組織、喉癌組中的陽性表達率分別為:0％、19.4％、32.1％;聲帶息肉、癌周組織、喉癌組相比有顯著性差異(x2=14.405，P＜0.01);HPV16E7在聲帶息肉、癌周組織、喉癌組中的陽

9、性表達率分別為:0％、22.2％、37.5％;聲帶息肉、癌周組織、喉癌組相比有顯著性差異(x2=14.405，P＜0.01);Rb在聲帶息肉、癌周組織、喉癌組中的陽性表達率分別為:86.1％、58.3％、51.8％;聲帶息肉、癌周組織、喉癌組相比有顯著性差異(x2=11.639,P＜0.01):
　　 ②ANXA1在Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期的陽性表達率分別為:45.4％，39.1％;兩組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);P16蛋白在Ⅰ

10、～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期的陽性表達率分別為:54.5％，17.4％;兩組相比有顯著性差異(x2=7.844，P＜0.01);COX-2蛋白在Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期的陽性表達率分別為:63.6％，91.3％;兩組相比有顯著性差異(x2=5.534,P＜0.05);HPV16/18E6蛋白在Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期的陽性表達率分別為:30.3％，34.8％;兩組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);HPV16E7蛋白在Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期的陽性表達率分別為:36.

11、3％，39.1％;兩組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);Rb蛋白在Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期的陽性表達率分別為:51.5％，52.2％;兩組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);
　　 ③ANXA1在高中分化和低分化的陽性表達率分別為:18.4％，94.4％;兩組相比有顯著性差異(x2=28.826，P＜0.01);P16蛋白在高中分化和低分化的陽性表達率分別為:52.6％，11.1％;兩組相比有顯著性差異(x2=8.828，P＜0.01)

12、;COX-2蛋白在高中分化和低分化的陽性表達率分別為:65.8％，94.4％;兩組相比有顯著性差異(x2=5.349，P＜0.05);HPV16/18E6蛋白在高中分化和低分化的陽性表達率分別為:28.9％，38.9％;兩組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);HPV16E7蛋白在高中分化和低分化的陽性表達率分別為:36.8％，38.8％;兩組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);Rb蛋白在高中分化和低分化的陽性表達率分別為:50.0％，50.

13、0％;兩組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);
　　 結(jié)論:
　　 1.ANXA1在喉鱗癌發(fā)生中是較為獨立的早期事件，對于喉鱗癌可能是一個獨立的負(fù)性腫瘤標(biāo)記因子;
　　 2.P16蛋白、ANXA1、Rb蛋白隨著喉部粘膜病變程度（細胞分化程度、腫瘤臨床）的加重，陽性表達率逐漸下降，表明P16蛋白、ANXA1、Rb蛋白的失活或缺失與喉癌發(fā)生有關(guān)。
　　 3.HPV16E6、COX-2、HPV16E7蛋白隨著喉部