磺酸化甲殼素和磺酸化殼聚糖的生物學功能和安全性研究.pdf

1、目的:甲殼素、殼聚糖糖殘基上羥基能與含氧無機酸發(fā)生酯化反應,氨基上也可發(fā)生酯化反應。在甲殼素、殼聚糖的眾多酯化反應中，研究最多的是兩者的硫酸酯化反應。酯化產物磺酸化甲殼素（S-CT）、磺酸化殼聚糖（S-CTS）具有良好的水溶性、成膜性、生物降解性等,在輕工業(yè)、食品、醫(yī)藥、農業(yè)等領域具有廣泛的應用前景。已有研究表明S-CT、S-CTS具有抗凝血、抗血栓、抗氧化、抗病毒、抗動脈硬化、抗腫瘤等多種生物學活性，但對其生物安全性評價甚少。本論文通

2、過磺化反應分別合成S-CT、S-CTS,旨在研究S-CT、S-CTS的生物安全性，探討其抗凝效果，對人臍靜脈血管內皮細胞（HUVEC）體外生長影響，以及對人宮頸癌細胞HeLa、人喉表皮樣癌HEp-2細胞、人胃癌細胞SGC-7901體外生長的影響,為S-CT、S-CTS安全性應用提供實驗依據。
　　方法：
　　1、通過甲殼素/殼聚糖的羥基（尤其是C6-OH）與磺化劑（氯磺酸/濃硫酸混酸）發(fā)生低溫非均相酯化反應合成磺酸化甲殼素（

3、S-CT）/磺酸化殼聚糖（S-CTS）。分別對S-CT、S-CTS進行純化及理化性質測定。
　　2、通過兔皮內刺激反應，評價兩種材料對機體的短期刺激反應強度；以膠體、膜片為載體，分別評價兩種材料的皮下、肌肉組織相容性及體內降解性；通過溶血率測定，評價兩種材料的血液相容性。
　　3、通過全血凝血試驗研究S-CT、S-CTS體外抗凝血功能，在細胞水平，采用顯微觀察結合MTT法評價S-CT、S-CTS對人血管內皮細胞HUVEC、人

4、宮頸癌細胞HeLa、人喉表皮樣癌HEp-2細胞以及人胃癌細胞SGC-7901體外生長的作用。
　　結果：
　　1、紅外圖譜顯示兩種材料均發(fā)生磺化取代，測定兩者均具有較高取代度。
　　2、兩種材料皮內刺激反應結果均符合國家要求，表現出良好的血液相容性。膠體在體內降解極快，炎癥反應極輕微。膜片在體內呈線性速率降解，炎癥反應隨時間逐漸減輕，兩種材料整體表現出良好的生物組織相容性以及體內降解性。
　　3、S-CT、S-C

5、TS在2.5-10mg/mL濃度范圍內，均具有明顯的抗凝作用，其中S-CTS的抗凝效果優(yōu)于S-CT。兩種材料在125-250μg/mL濃度范圍內對人臍靜脈血管內皮細胞（HUVEC）體外生長有一定的促進作用，其中以250mg/mLS-CT,作用2d，促進效果最為顯著。兩種材料在62.5-1000μg/mL濃度范圍內對人宮頸癌細胞(HeLa)、人喉表皮樣癌細胞（HEp-2）、人胃癌細胞（SGC-7901）的體外增殖都有顯著抑制作用，S-CT

6、對三種癌細胞最大抑制率分別可達到48.52％（6d）、35.73%（6d）、57.43%（6d），S-CTS對三種癌細胞最大抑制率分別可達到65.23%（6d）、43.19%（6d）、44.32%（4d），并且基本遵循抑制率隨著作用時間的增加、濃度的增加而增加這個趨勢，呈現一定的量效關系。
　　結論：兩種材料均具有良好的生物相容性，體內降解性良好，各項指標均符合國家對安全性實驗的要求。在生物學功能方面，表現為抗凝效果顯著；對正常人