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文檔簡介
1、豬傳染性胸膜肺炎(Porcine contagious pleuropneumonia,PCP)是由胸膜肺炎放線桿菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的一種豬的接觸傳染性疾病。不同國家和地區(qū)流行的血清型不同,給養(yǎng)殖業(yè)帶來嚴重的經(jīng)濟損失。疫苗免疫接種是防治PCP的有效措施,但是目前商品化的APP疫苗主要是針對血清型1、2和7的,不能滿足特定地區(qū)流行的其他血清型的需求。本研究以前期分離鑒定的APP
2、安徽分離株和福建分離株為受試菌株,從中篩選出優(yōu)勢血清型和生物型的強毒株,研制二價滅活苗,旨在為安徽和福建省PCP的防控提供物質基礎。
首先,從17株APP分離株中篩選強毒株。將17株APP分離株于37℃,150 rpm/min培養(yǎng)至對數(shù)期,以7×107CFU/mL、1.4×108CFU/mL和2.8×108CFU/mL三個不同濃度菌液腹腔注射昆明系小鼠,根據(jù)小鼠死亡情況,初步確定分離株BB1502和FJ1508為強毒株。
3、> 然后,采用細菌學方法測定分離株BB1502和 FJ1508對小鼠的半數(shù)致死量(LD50);制作病理組織切片,觀察病理變化;以滅活后菌株免疫小鼠,測定其免疫原性、免疫保護性和交叉保護性。結果顯示,分離株BB1502和FJ1508對小鼠的LD50分別為4.9×108 CFU/mL和1.75×108 CFU/mL,多個組織病理變化明顯。鼠抗BB1502和FJ1508抗體的瓊擴效價分別為1:32和1:16。BB1502滅活菌體對小鼠的免疫
4、保護率約為90%,F(xiàn)J1508滅活菌體的免疫保護率約為70%;BB1502滅活菌體對FJ1508菌株的免疫保護率約為10%,F(xiàn)J1508滅活菌體對菌株BB1502沒有保護力。結果表明,分離株BB1502和FJ1508具有良好的免疫原性和免疫保護性,可以作為疫苗候選菌株。
最后,將分離株BB1502和FJ1508滅活菌體按1:1比例混合,使兩株細菌的濃度均為3.0×109 CFU/mL,然后按9:1的比例加入氫氧化鋁膠佐劑混勻,
5、制備二價滅活苗,并對其進行無菌檢驗、安全性檢驗和效力檢驗。結果顯示,二價滅活苗穩(wěn)定性和安全性良好,對菌株BB1502和FJ1508的免疫保護力分別為90%和70%。
綜上所述,本研究通過對17株APP菌株毒力、抗原性與穩(wěn)定性的測定,成功篩選出BB1502(生物型I型,血清型12型)和FJ1508(生物型II型)兩株APP強毒株作為疫苗候選菌株,并研制了APP二價滅活苗,該疫苗對同型菌株攻擊小鼠具有較好的免疫保護作用,從而為AP
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