環(huán)境內(nèi)分泌干擾物DEHP導(dǎo)致生精功能障礙機(jī)制與干預(yù)的動物實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景：不孕不育嚴(yán)重困擾著人類生殖健康，不育(孕)約占育齡夫婦的10％～15％，其中男性因素約占50％。近一百年來，男性精子不論數(shù)量還是質(zhì)量都出現(xiàn)了明顯下降的趨勢。環(huán)境因素被視為這種“下降”的主要原因之一。越來越多流行病學(xué)證據(jù)顯示“白色污染”是導(dǎo)致這一改變的重要因素之一。其中，鄰苯二甲酸二乙基己酯（Di(2-Ethylhexyl)Phthalate，DEHP）使用較多，危害較大，危害作用尤為明顯。DEHP屬于鄰苯二甲酸酯類化合物（PAEs

2、）中重要的一員，作為塑料增塑劑在各個(gè)行業(yè)中大使用。尤其在食品包裝材料、醫(yī)用材料中的應(yīng)用，由于可通過消化道或循環(huán)系統(tǒng)與人體接觸，故危害更大。DEHP同時(shí)也是多種化學(xué)工業(yè)產(chǎn)品的重要成分，通過各種途徑對環(huán)境造成嚴(yán)重的“白色污染”。相關(guān)資料顯示：成人男性不育患者尿中DEHP代謝產(chǎn)物濃度高于正常對照。本課題組前期研究也證實(shí)DEHP可導(dǎo)致雄性大鼠生精功能障礙。
　　DEHP作為環(huán)境污染物，已被證實(shí)與男性不育相關(guān)，但其具體機(jī)制尚未完全明確，因此

3、本課題擬通過制備DEHP誘發(fā)的SD大鼠生精功能障礙模型，探討其致病機(jī)制及干預(yù)措施，為治療及預(yù)防男性不育，提高人口素質(zhì)提供科學(xué)依據(jù)。
　　目的：探討DEHP導(dǎo)致生精功能障礙的病理學(xué)分子機(jī)制，并探索其干預(yù)措施。
　　方法：
　?。?）建立DEHP誘導(dǎo)大鼠不育模型，明確DEHP與生精功能障礙的量效關(guān)系；
　　（2）免疫組織化學(xué)方法評估大鼠生精細(xì)胞凋亡水平；
　?。?）監(jiān)測DEHP作用于大鼠及5-aza-CdR干預(yù)

4、后大鼠基因組DNA甲基化狀態(tài)、Bcl-2基因啟動子甲基化修飾及基因表達(dá)情況，明確DNA甲基化修飾在DEHP誘導(dǎo)生精細(xì)胞凋亡發(fā)生過程中的調(diào)控作用；
　?。?）以葉酸作為單獨(dú)干預(yù)劑處理后，檢測生精功能、生精細(xì)胞凋亡水平以及Bcl-2基因啟動子甲基化水平。
　　結(jié)果：
　　1.DEHP成功誘導(dǎo)出SD大鼠生精功能障礙模型，表現(xiàn)為睪丸體積變小，質(zhì)地變軟；組織學(xué)變現(xiàn)為曲細(xì)精管變細(xì)，附睪精子計(jì)數(shù)降低；流式細(xì)胞儀檢測發(fā)現(xiàn)生精細(xì)胞凋亡增

5、加。
　　2.免疫組化、RT-PCR及Western-blot均顯示在實(shí)驗(yàn)組大鼠睪丸組織中，BaxmRNA與蛋白表達(dá)顯著高于正常對照組而Bcl-2的相應(yīng)指標(biāo)則低于正常對照組。
　　3.甲基化特異性PCR結(jié)果提示實(shí)驗(yàn)組大鼠睪丸組織Bcl-2第一外顯子甲基化水平較正常組降低，整體甲基化水平也較正常組降低。
　　4.用葉酸進(jìn)行干預(yù)后，免疫組織化學(xué)及Western-blot檢測到大鼠睪丸Bcl-2的表達(dá)較實(shí)驗(yàn)組升高。