帕立骨化醇對血管緊張素Ⅱ誘導的大鼠腎間質(zhì)成纖維細胞活化及增殖的影響.pdf

1、目的:觀察帕立骨化醇對血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)誘導的大鼠腎間質(zhì)成纖維細胞(NRK49F)增殖及活化的影響,并初步探討其機制。
　　 方法:將傳代培養(yǎng)的NRK49F按以下分組加入不同干預因素:帕立骨化醇終濃度分別為10-6mol／L、10-7mol／L、10-8mol／L,AngⅡ終濃度為10-6mol／L。①對照組:NRK49F培養(yǎng)液中不加入干擾因素；②帕立骨化醇組:NRK49F培養(yǎng)液中分別加入終濃度為

2、10-6mol／L、10-7mol／L、10-8mol／L的帕立骨化醇；③AngⅡ組:NRK49F培養(yǎng)液中加入終濃度為10-6mol／L的AngⅡ；④AngⅡ+帕立骨化醇組:NRK49F培養(yǎng)液中同時加入終濃度為10-6mol／L的AngⅡ和終濃度分別為10-6mol／L、10-7mol、L10-8mol／L的帕立骨化醇。(1)用WST-1法檢測腎間質(zhì)成纖維細胞數(shù)目,在酶聯(lián)免疫檢測儀450nm波長處測定吸光光度(OD)值,OD值越大代表細

3、胞數(shù)目越多。(2)采用細胞免疫化學法(SP法)檢測各組細胞α-SMA蛋白表達,并用mage-pro plus6.0分析系統(tǒng)對α-肌動蛋白的表達進行半定量分析,以顆粒的光密度IOD值反映陽性細胞蛋白表達總量:IOD值越大代表陽性細胞蛋白表達總量越多。(3)流式細胞儀檢測NRK49F的細胞周期及凋亡。各組數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差((x)±S)表示,使用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對結果進行分析,組間差異采用單因素設計的方差分析,兩兩比較采用LSD法,

4、P<0.05有統(tǒng)計學意義,P<0.01為有顯著統(tǒng)計學意義。
　　 結果:(1)WST-1法檢測腎間質(zhì)成纖維細胞數(shù)目檢測結果:①帕立骨化醇能抑制基礎狀態(tài)下的NRK49F增殖:與對照組OD值0.3956相比,10-6mol／L、10-7mol／L、10-8mol／L帕立骨化醇的OD值分別為0.1288、0.2218、0.3208；對照組與帕立骨化醇組、帕立骨化醇組間兩兩比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。②帕立骨化醇能抑制Ang

5、Ⅱ誘導的NRK49F的增殖:與AngⅡ組OD值0.4853相比,10-6mol／L、10-7mol／L、10-8mol／L帕立骨化醇+AngⅡ的OD值分別下降了0.1837、0.1466和0.1071； AngⅡ組與帕立骨化醇組、帕立骨化醇組間兩兩比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(2)α-SMA蛋白表達檢測結果:①帕立骨化醇能明顯抑制基礎狀態(tài)的NRK49F的α-SMA的表達:與對照組IOD值68.7438相比,10-6mol／L

6、、10-7mol／L、10-8mol／L帕立骨化醇的IOD值分別為0、0、35.6285；對照組與帕立骨化醇組、帕立骨化醇組間兩兩比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。②帕立骨化醇能明顯AngⅡ誘導的NRK-49Fα-SMA蛋白的表達,從而抑制AngⅡ誘導的NRK49F的活化:與AngⅡ組IOD值237.54相比,10-6mol／L、10-7mol／L、10-8mol／L帕立骨化醇+AngⅡ的IOD值分別下降了214.504、206.

7、584和167,75.44；AngⅡ組與帕立骨化醇組、帕立骨化醇組間兩兩比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(3)流式細胞學檢測結果:在基礎狀態(tài)下,經(jīng)過不同濃度的帕立骨化醇(10-6mol／L、10-7mol／L、10-8mol／L)誘導48小時后,NRK-49F細胞G1期細胞較對照組增加(22.％、16％、13％),在AngⅡ組誘導狀態(tài)下,帕里骨化醇干預組G1期細胞較AngⅡ組亦明顯增加(22.％、13％、11％)(P<0.05)