馬兜鈴酸和TGF-β協(xié)同誘導(dǎo)人類腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化及其與NF-κB關(guān)系的初步探討.pdf

1、該0實(shí)驗(yàn)旨在探討馬兜鈴酸(AA)與轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-β)在誘導(dǎo)人類腎小管上皮細(xì)胞(HKC)轉(zhuǎn)分化中是否存在協(xié)同作用,并探討核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的活化與此種細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的關(guān)系.方法:該實(shí)驗(yàn)選擇HKC細(xì)胞為研究對(duì)象.首先通過(guò)形態(tài)學(xué)、TUNEL方法觀察AA誘導(dǎo)HKC凋亡的作用,并初步確定引起HKC凋亡的AA濃度.然后以相對(duì)較低的AA濃度,通過(guò)免疫組化、流式細(xì)胞儀檢測(cè)法以觀察AA、TGF-β單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用誘導(dǎo)轉(zhuǎn)分化的作用.最后選擇可誘導(dǎo)出較強(qiáng)

2、轉(zhuǎn)分化作用的AA和TGF-β濃度,采取激光洪聚焦顯微鏡和蛋白免疫印跡的方法,分別檢測(cè)此條例上HKC細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的活性變化,并觀察加入N-酰半胱氨酸(NAC)抑制NF-κB后,HKC轉(zhuǎn)分化現(xiàn)象的變化.結(jié)論:1、一定濃度的AA可以引起體外培養(yǎng)的人腎小管上皮細(xì)胞(HKC)凋亡;2、AA(10ug/ml)與TGF-β(10ng/ml)誘導(dǎo)HKC轉(zhuǎn)分化具有顯著的協(xié)同作用;3、核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的活化可能在AA和TGF-β協(xié)同誘導(dǎo)HK