帕金森病(PD)致病基因LRRK2啟動子分離及PD相關(guān)基因CSP-α、Nrdp1、USP24突變篩查研究.pdf

1、中南大學博士學位論文帕金森?。≒D）致病基因LRRK2啟動子分離及PD相關(guān)基因CSPα、Nrdp1、USP24突變篩查研究姓名：莫曉云申請學位級別：博士專業(yè)：醫(yī)學遺傳學指導教師：夏昆20100501博士學位論文中文摘要胞和Hela細胞中進行各缺失片段的瞬時轉(zhuǎn)染及熒光素酶活性分析，確定啟動子所在區(qū)域。并運用Matlnspector對LRRK2基因核心啟動子可能的順式元件進行生物信息學分析，為將來順式元件的鑒定及轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究奠定基礎(chǔ)。結(jié)果：

2、本研究對LRRK2基因在腦組織中表達的最主要剪切本ENST00000298910進行分析，以LRRK2基因的RefSeq序列NM198578的蛋白翻譯起始位點“ATG“的A堿基為l位進行描述。結(jié)果顯示530／143間的387bp在2個細胞株中具有最強的啟動活性；將片段一530／143自5’向3’方向截短后，啟動活性在兩個細胞株中均明顯下降，但最短的缺失片段(232／143)在2個細胞株中的啟動活性仍顯著高于pGL3Basic的基礎(chǔ)值(薩

3、005)，因此232／143間的89bp很可能存在LRRK2基因的基礎(chǔ)啟動子，其在神經(jīng)細胞及非神經(jīng)性細胞中均能啟動報告基因的表達。將片段530／143自5，向3’方向缺失104bp后，啟動活性在兩個細胞株中均明顯減弱(薩O05)，因此推測在530至426區(qū)間可能存在具有正性調(diào)控啟動活性的順式作用元件；將片段一659／1自3’向5’方向截短142bp得到片段659／143，其啟動活性明顯增強(正O05)，而片段659／143自5’向3’方

4、向截短129bp得到片段530／143，其啟動活性也增強(胙O05)，因此推測143至1區(qū)間、659至530區(qū)間可能存在負性調(diào)控啟動活性的順式作用元件。將片段一426／143自5響3’方向截短94bp得到片段332／143，其啟動活性在Hela細胞減弱(FO05)，而在SH—SY5Y細胞中無明顯變化(礦O05)；將片段332／143自5’向37方向截短lOObp得到的片段232／143，其啟動活性在Hela細胞中增強(廬005)，而在S