BMP9對(duì)心肌前體干細(xì)胞改善心梗大鼠心功能的影響.pdf

1、本文研究了BMP9對(duì)心肌前體干細(xì)胞改善心梗大鼠心功能的影響。本研究分兩部分：
　　 第一部分：
　　 目的：通過(guò)293細(xì)胞擴(kuò)增得到高滴度的腺病毒,用AdBMP9重組腺病毒感染心肌前體干細(xì)胞使之高表達(dá)BMP9。
　　 方法：培養(yǎng)并利用293細(xì)胞對(duì)低滴度的AdBMP9和AdGFP腺病毒進(jìn)行反復(fù)擴(kuò)增后收集得到高滴度腺病毒。當(dāng)心肌前體干細(xì)胞傳代貼壁至70％～80％時(shí),在5 ml完全培養(yǎng)基中加入20μL擴(kuò)增后的腺病毒感染心

2、肌前體干細(xì)胞6～8小時(shí)后換液,24小時(shí)后熒光倒置顯微鏡觀察綠色熒光表達(dá)并用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞感染效率,RT-PCR技術(shù)檢測(cè)被感染的心肌前體干細(xì)胞BMP9的表達(dá)量。
　　 結(jié)果：⑴病毒原液經(jīng)293細(xì)胞反復(fù)擴(kuò)增后,獲得了高滴度的AdBMP9和AdGFP。⑵高滴度的AdBMP9和AdGFP分別感染心肌前體干細(xì)胞24小時(shí)后,流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光表達(dá)效率分別為46％和45％。⑶RT-PCR結(jié)果顯示AdBMP9感染的心肌前體干細(xì)胞BMP9的表

3、達(dá)量明顯增高(P<0.05),而AdGFP感染的心肌前體干細(xì)胞中BMP9的表達(dá)量跟心肌前體干細(xì)胞本身相比并無(wú)明顯的差異(P>0.05)。
　　 結(jié)論：利用293細(xì)胞擴(kuò)增可以得到高滴度的腺病毒；高滴度的腺病毒對(duì)心肌前體干細(xì)胞有較高的感染率；AdBMP9感染心肌前體干細(xì)胞后BMP9的表達(dá)量明顯增高。
　　 第二部分：
　　 目的：探討B(tài)MP9能否促進(jìn)心肌前體干細(xì)胞改善心梗大鼠心功能。
　　 方法：26只雄性S

4、D大鼠隨機(jī)分成三組(1)MI組(n=10):(2)MI+GFP組(n=8)；(3)MI+BMP9組(n=8)。動(dòng)脈圓錐下結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支10～15min后,在梗死心肌組織周圍即時(shí)多點(diǎn)注入生理鹽水混勻的腺病毒感染的心肌前體干細(xì)胞懸液(100μL,5～6×106個(gè)/mL)。細(xì)胞植入四周后,利用超聲心動(dòng)圖檢測(cè)左室心功能參數(shù),Masson染色計(jì)算心臟梗死面積及觀察植入細(xì)胞形態(tài)學(xué)和免疫熒光檢測(cè)α-MHC及α-actin蛋白的表達(dá)。
　　

5、 結(jié)果：⑴動(dòng)脈圓錐下結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈的左前降支后,成功建立心梗模型。術(shù)后4周形態(tài)學(xué)顯示,心肌梗死部位心肌細(xì)胞稀少,胞漿稀薄,有大量的纖維組織及炎癥細(xì)胞,且左心室壁明顯變薄。⑵超聲心動(dòng)圖結(jié)果顯示細(xì)胞植入4周時(shí),MI+BMP9組LVESD較MI組降低而FS則升高,均有顯著性差異(P<0.05,P<0.01)；且MI+BMP9組與MI+GFP組比較,改善更為明顯(P<0.05)。⑶MI組大鼠心肌梗死面積的百分比為39.7％±2％(n=8),

6、MI+GFP組的心梗面積百分比為37.3％±3％(n=6),MI+BMP9組的心梗面積百分比為34.6％±3％(n=7)。MI+GFP組同MI組比較(P<0.05),MI+BMP9組同MI組比較(P<0.01)且MI+BMP9組同MI+GFP組相比P<0.05)。⑷植入細(xì)胞4周后,形態(tài)學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)植入的細(xì)胞離正常心肌組織越接近,細(xì)胞胞漿越飽滿,而在注入細(xì)胞團(tuán)塊中央的細(xì)胞胞漿稀少。免疫熒光結(jié)果顯示,高表達(dá)BMP9的心肌前體干細(xì)胞和GFP標(biāo)記