經(jīng)典Wnt信號(hào)通路對(duì)BMP9誘導(dǎo)干細(xì)胞骨向分化的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　探討經(jīng)典Wnt信號(hào)通路與骨形態(tài)發(fā)生蛋白9(bone morphogenetic protein9，BMP9)誘導(dǎo)小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞C3H10T1/2細(xì)胞骨向分化的相互影響及分子機(jī)制。
　　方法：
　　1、以小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞C3H10T1/2為目的細(xì)胞，根據(jù)不同的處理因素將其分為4個(gè)組：GFP組、BMP9組、Wnt3a組、BMP9+Wnt3a組：
　　2、通過染色和定量測(cè)定早期成骨標(biāo)志堿性磷酸酶(ALP)

2、的活性；
　　3、應(yīng)用Western blotting、Q-PCR檢測(cè)晚期成骨標(biāo)志骨鈣蛋白(OC)、骨橋蛋白(OPN)的表達(dá)；
　　4、應(yīng)用茜素紅染色檢測(cè)鈣鹽沉積的情況；
　　5、應(yīng)用Western blotting、Q-PCR檢測(cè)成骨轉(zhuǎn)錄因子Runx2的表達(dá)；
　　6、應(yīng)用異位成骨動(dòng)物模型進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證二者對(duì)干細(xì)胞成骨分化的相互影響。
　　結(jié)果：
　　1、在加入處理因素后第7天進(jìn)行ALP染色和活性測(cè)

3、定，發(fā)現(xiàn)Wnt3a+BMP9組的ALP活性比BMP9組、Wnt3a組明顯增高(P<0.01)。
　　2、第14天進(jìn)行茜素紅染色觀測(cè)鈣鹽沉積，結(jié)果發(fā)現(xiàn)從大體標(biāo)本可以看到從GFP組、Wnt3a組、BMP9組、BMP9+Wnt3a組顏色有遞增的趨勢(shì)，鏡下發(fā)現(xiàn)BMP9+Wnt3a組的鈣鹽結(jié)節(jié)要明顯多于BMP9組、Wnt3a組。
　　3、在第9天應(yīng)用Western blotting和Q-PCR檢測(cè)OC、OPN的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)OC和OP

4、N的表達(dá)在BMP9+Wnt3a組高于BMP9組和Wnt3a組。
　　4、在第2天應(yīng)用Western blotting和Q-PCR檢測(cè)Runx2的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Runx2在BMP9+Wnt3a組中的表達(dá)要高于BMP9組和Wnt3a組
　　5、動(dòng)物體內(nèi)接種4W后取出異位成骨的骨塊，觀測(cè)大體標(biāo)本以及進(jìn)行HE、Masson染色，結(jié)果顯示BMP9+Wnt3a組的骨塊大于BMP9組和Wnt3a組(P<0.05)，通過HE、Masson染