PI3K-Akt信號(hào)通路介導(dǎo)HER2與FASH相互作用調(diào)控大腸癌惡性表型及其分子機(jī)制的研究.pdf

1、[背景與目的]
　　脂肪酸合酶(fattyacidsynthase，F(xiàn)ASN)介導(dǎo)的脂肪酸從頭合成在多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中具有重要作用，有研究表明HER2活化能夠?qū)е翭ASN的過(guò)表達(dá)并且誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞的惡性表型。此外，有報(bào)道PI3K/Akt信號(hào)通路參與多種腫瘤細(xì)胞的物質(zhì)代謝，并且對(duì)其惡性表型具有重要的調(diào)控作用。然而，HER2以及FASN是否通過(guò)PI3K/Akt信號(hào)通路調(diào)控大腸癌的惡性表型尚未見(jiàn)報(bào)道，其分子機(jī)制值得探究。本研究

2、旨在探討“HER2-PI3K/Akt-FASN軸”調(diào)控大腸癌惡性表型的分子機(jī)制，以期為深入了解大腸癌的發(fā)病機(jī)理以及尋找新的分子診斷標(biāo)記物和靶向治療靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)理論依據(jù)。
　　[方法]
　　1.RT-qPCR檢測(cè)人大腸癌細(xì)胞株Caco-2、HT-29、LoVo、LS174T的HER2、FASNmRNA表達(dá)；構(gòu)建陰性對(duì)照干擾質(zhì)粒，測(cè)序鑒定后瞬時(shí)轉(zhuǎn)染4株細(xì)胞檢測(cè)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率。篩選HER2、FASNmRNA同時(shí)高表達(dá)，并且具有高轉(zhuǎn)

3、染效率的大腸癌細(xì)胞作為靶細(xì)胞。
　　2.構(gòu)建4個(gè)HER2干擾質(zhì)粒，測(cè)序鑒定后瞬時(shí)轉(zhuǎn)染靶細(xì)胞，RT-qPCR檢測(cè)各轉(zhuǎn)染細(xì)胞的HER2mRNA表達(dá)，篩選干擾效果最佳的HER2干擾質(zhì)粒；將干擾效果最佳的HER2干擾質(zhì)粒以及陰性對(duì)照干擾質(zhì)粒分別穩(wěn)定轉(zhuǎn)染靶細(xì)胞，RT-qPCR、WesternBlot檢測(cè)靶細(xì)胞的HER2、FASN表達(dá)，流式細(xì)胞儀檢測(cè)靶細(xì)胞的凋亡，MTT實(shí)驗(yàn)以及平板克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察靶細(xì)胞的增殖能力，Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢

4、測(cè)靶細(xì)胞的遷移能力。
　　3.構(gòu)建4個(gè)FASN干擾質(zhì)粒，測(cè)序鑒定后瞬時(shí)轉(zhuǎn)染靶細(xì)胞，RT-qPCR檢測(cè)各轉(zhuǎn)染細(xì)胞的FASNmRNA表達(dá)，篩選干擾效果最佳的FASN干擾質(zhì)粒；將干擾效果最佳的FASN干擾質(zhì)粒以及陰性對(duì)照干擾質(zhì)粒分別穩(wěn)定轉(zhuǎn)染靶細(xì)胞，RT-qPCR、WesternBlot檢測(cè)靶細(xì)胞的FASN、HER2表達(dá)，流式細(xì)胞儀檢測(cè)靶細(xì)胞的凋亡，MTT實(shí)驗(yàn)以及平板克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察靶細(xì)胞的增殖能力，Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)靶細(xì)胞的

5、遷移能力。
　　4.將干擾效果最佳的HER2干擾質(zhì)粒、干擾效果最佳的FASN干擾質(zhì)粒以及陰性對(duì)照干擾質(zhì)粒分別穩(wěn)定轉(zhuǎn)染靶細(xì)胞，RT-qPCR、WesternBlot檢測(cè)靶細(xì)胞的PI3K、Akt、Phospho-Akt蛋白表達(dá)、細(xì)胞增殖能力、克隆形成率(2.05％±0.01)、遷移細(xì)胞數(shù)(182±14.53)、S期細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(7.21%±0.01)均明顯低于空白對(duì)照組以及溶劑對(duì)照組(P<0.01)；G1期細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(87.76%±0.

6、01)明顯高于空白對(duì)照組以及溶劑對(duì)照組(P<0.01)。
　　[結(jié)論]
　　1.HER2-RNAi能夠有效抑Caco-2細(xì)胞的HER2表達(dá)，進(jìn)而下調(diào)Caco-2細(xì)胞的FASN表達(dá)、誘導(dǎo)Caco-2細(xì)胞的早期凋亡、抑制Caco-2細(xì)胞的增殖以及遷移能力。
　　2.FASN-RNAi能夠有效抑制Caco-2細(xì)胞的FASN表達(dá)，進(jìn)而下調(diào)Caco-2細(xì)胞的HER2表達(dá)、誘導(dǎo)Caco-2細(xì)胞的早期凋亡、抑制Caco-2細(xì)胞的增殖

7、以及遷移能力。
　　3.HER2-RNAi、FASN-RNAi以及PI3K特異性抑制劑ZSTK474均能夠不同程度地抑制Caco-2細(xì)胞的PI3K/Akt信號(hào)通路活性；抑制PI3K/Akt信號(hào)通路的活性能夠明顯下調(diào)Caco-2細(xì)胞的HER2以及FASN表達(dá)、誘導(dǎo)Caco-2細(xì)胞的G1期細(xì)胞周期阻滯、抑制Caco-2細(xì)胞的增殖以及遷移能力。
　　提示PI3K/Akt信號(hào)通路介導(dǎo)的HER2與FASN相互作用能夠有效調(diào)控大腸癌細(xì)胞