神經(jīng)酰胺在軟脂酸培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞PKB-eNOS信號通路變化中的作用機制研究.pdf

1、目的:觀察高濃度的游離脂肪酸：軟脂酸(palmihate)、棕櫚油酸(palmitoleate)、油酸(oleate)、亞油酸(linoleate)培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)內(nèi)神經(jīng)酰胺(ceramide)濃度變化，探討在游離脂肪酸培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細(xì)胞是否存在神經(jīng)酰胺積聚及可能的機制。 方法: ①4種游離脂肪酸對細(xì)胞膜及細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)酰胺的影響：HUVECs分別用600μM軟脂酸、棕櫚油酸、油酸、亞油酸培養(yǎng)16小時，

2、以高壓液相色譜聯(lián)合質(zhì)譜的方法(LC/MS/MS)檢測細(xì)胞膜及細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)酰胺濃度的變化。 ②軟脂酸對細(xì)胞膜及細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)酰胺的影響：HUVECs分別用200μM、400μM、600μM軟脂酸培養(yǎng)16小時，600μM軟脂酸培養(yǎng)4、8、16、24、32小時，以高壓液相色譜聯(lián)合質(zhì)譜的方法檢測細(xì)胞膜及細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)酰胺濃度的變化。 ③神經(jīng)酰胺基礎(chǔ)合成途徑特異性阻斷劑myriocin和FB1對軟脂酸培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞神經(jīng)酰胺的影響： H

3、UVECs用600μM軟脂酸+10μM myriocin培養(yǎng)16小時；或600μM軟脂酸+10μM FB1培養(yǎng)細(xì)胞16小時以高壓液相色譜聯(lián)合質(zhì)譜的方法檢測細(xì)胞膜及細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)酰胺濃度的變化。 結(jié)果: ①軟脂酸呈時間和劑量依賴性的升高人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞膜及細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)酰胺的濃度，以16h變化最明顯。高濃度棕櫚油酸、油酸、亞油酸對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞膜及細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)酰胺的濃度無顯著影響。 ②高濃度軟脂酸顯著升高人臍靜脈內(nèi)