瘦素及其蛋白在甲狀腺相關(guān)眼病眼眶脂肪組織中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的 甲狀腺相關(guān)眼病(TA0)是以眼外肌和眶脂肪／結(jié)締組織容量增多為特征的自身免疫性疾病。眼眶內(nèi)前脂肪成纖維細(xì)胞在適當(dāng)條件下能轉(zhuǎn)化為脂肪細(xì)胞，使眼眶脂肪組織增多，引起眼球前突，它還能分泌多種細(xì)胞因子：瘦素(leptin)作為脂肪細(xì)胞分泌的特異性因子，它可能通過(guò)多種機(jī)制參與TAO的發(fā)生發(fā)展。本研究的目的是利用TAO患者和正常人眼眶脂肪組織和體外誘導(dǎo)分化的眼眶脂肪細(xì)胞，檢測(cè)瘦素mRNA的表達(dá)情況；TNF-α、IL-6對(duì)瘦素mRNA表

2、達(dá)的影響；重組人瘦素蛋白(rh-1eptin)對(duì)TAO患者眼眶前脂肪成纖維細(xì)胞增殖、移行以及細(xì)胞分化過(guò)程中細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)形成的作用。探討瘦素在TAO發(fā)病機(jī)制中的作用及意義，探索防治TAO的新途徑。 方法 1．提取TAO患者和正常人眼眶脂肪組織總RNA，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法，檢測(cè)瘦素mRNA的表達(dá)。 2．對(duì)體外培養(yǎng)TAO患者與正常人眼眶前脂肪成纖維細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法檢測(cè)分化后細(xì)胞內(nèi)瘦素m

3、RNA的表達(dá)。油紅染色結(jié)合圖像分析技術(shù)測(cè)定分化過(guò)程中細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的形成。 3．采用不同濃度、作用時(shí)間的TNF-α、IL-6處理TAO患者分化第10天的眼眶脂肪細(xì)胞，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法檢測(cè)瘦素mRNA表達(dá)。 4．用重組人瘦素蛋白處理體外培養(yǎng)的TAO患者眶前脂肪成纖維細(xì)胞，MTT法檢測(cè)細(xì)胞的增殖，劃線法檢測(cè)細(xì)胞的移行。重組人瘦素蛋白處理TAO患者分化第10天的眼眶脂肪細(xì)胞，油紅染色結(jié)合圖像分析技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)形成情況

4、。 結(jié)果 1．TAO患者與正常人眼眶脂肪組織樣本均表達(dá)瘦素mRNA；TAO患者眼眶脂肪組織中瘦素mRNA的表達(dá)量高于正常對(duì)照者。 2．體外培養(yǎng)的TAO患者和正常人眼眶前脂肪成纖維細(xì)胞在誘導(dǎo)分化刺激下，均能向脂肪細(xì)胞方向分化；細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)形成隨分化進(jìn)程而升高，且患者組高于正常人組；TAO患者分化后眼眶脂肪細(xì)胞的瘦素mRNA表達(dá)量高于正常人。 3．TNF-α、IL-6對(duì)TAO患者體外分化第10天的眼眶脂肪細(xì)胞的

5、瘦素mRNA表達(dá)有下調(diào)作用，呈時(shí)間一劑量依賴性。 4．500ng／ml重組人瘦素蛋白明顯促進(jìn)體外培養(yǎng)的TAO患者眼眶前脂肪成纖維細(xì)胞增殖，與對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但較低的濃度組未能觀察到具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的促增殖效果。500ng／ml重組人瘦素蛋白作用24h，促進(jìn)TAO患者眼眶前脂肪成纖維細(xì)胞的移行，隨劑量減少，促進(jìn)作用降低；其中，50-500ng／ml的瘦素實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。500ng／ml重組人瘦素蛋

6、白能抑制TA0患者眼眶脂肪細(xì)胞的脂質(zhì)形成，隨劑量減少，抑制作用降低。 結(jié)論 本研究結(jié)果顯示，TAO患者眼眶脂肪組織中的瘦素mRNA表達(dá)升高受眼眶微環(huán)境中細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)，眼眶脂肪組織中瘦素表達(dá)的增高能促進(jìn)眼眶前脂肪成纖維細(xì)胞的增殖、移行，或抑制細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)形成。瘦素在TAO的發(fā)病機(jī)制中可能起到一定的作用或有一種反饋調(diào)節(jié)的機(jī)理。對(duì)其蛋白表達(dá)、調(diào)節(jié)機(jī)制、信號(hào)傳導(dǎo)途徑等的進(jìn)一步研究不僅讓我們更接近TAO的發(fā)病機(jī)制，也可為T(mén)AO的預(yù)