過表達(dá)VCAM-1對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞免疫特性的影響.pdf

1、目的:克隆小鼠血管細(xì)胞粘附分子1(vascular cell adhesionmolecule-1，VCAM-1)cDNA全長，構(gòu)建綠色熒光蛋白標(biāo)記的VCAM-1基因逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。探討VCAM-1基因在間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells，MSC)中過表達(dá)對(duì)細(xì)胞免疫學(xué)特性的影響，為優(yōu)化MSC的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。
　　方法:采用DNA重組技術(shù)，將目的基因VCAM-1克隆至含有報(bào)告基因EGFP的逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載

2、體MIGR1中;在脂質(zhì)體介導(dǎo)下，將重組的逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，收獲攜帶VCAM-1基因的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒的上清，并感染MSC細(xì)胞系C3H10T1/2，熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和感染效率;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MSC膜表面的VCAM-1表達(dá)情況;3H-TdR摻入法測(cè)定過表達(dá)VCAM-1的MSC對(duì)其免疫學(xué)特性的影響。
　　結(jié)果:成功構(gòu)建過表達(dá)VCAM-1基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果表明VCAM-1在MSC細(xì)胞系C3H1

3、0T1/2中穩(wěn)定高表達(dá)。
　　進(jìn)一步，過表達(dá)VCAM-1基因的MSC細(xì)胞系C3H10T1/2形態(tài)無改變。與轉(zhuǎn)染空載體的C3H10T1/2相比，過表達(dá)VCAM-1的C3H10T1/2對(duì)于有絲分裂原誘導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞增殖抑制作用顯著增強(qiáng)，且這種抑制效應(yīng)呈劑量依賴性，隨著C3H10T1/2細(xì)胞數(shù)量的逐漸增加，其抑制效應(yīng)逐漸增強(qiáng)。當(dāng)C3H10T1/2與效應(yīng)細(xì)胞比例為1∶10時(shí)，轉(zhuǎn)染了空載體的C3H10T1/2組淋巴細(xì)胞增殖活性(cpm值)降