土壤耐藥菌及耐藥基因豐度與多樣性對(duì)高溫處理豬糞施用的短期響應(yīng).pdf

1、一埸H1大季YANGZHOUUNIVERSITY碩士學(xué)位論文學(xué)號(hào)叢圣!壘墨31密級(jí)(專(zhuān)業(yè)型)土壤耐藥菌及耐藥基因豐度與多樣性對(duì)高溫處理豬糞指導(dǎo)教師姓名：申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：論文提交日期：學(xué)位授予單位：施用的短期響應(yīng)李青亟學(xué)科專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)：2Q!魚(yú)生!!旦揚(yáng)州大學(xué)論文答辯日期：學(xué)位授予日期：答辯委員會(huì)主席：堡旦塹垂亟論文評(píng)閱人：居靜副教授張亞麗教授2016年12月農(nóng)業(yè)資源利用2Q!魚(yú)生12旦II中文摘要3、利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)不同施肥處理土

2、壤tetB、tetC、tetM、tetO、tetT、tetZ等6種四環(huán)素耐藥基因豐度動(dòng)態(tài)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示：(1)好氣條件下，相對(duì)于CK，新鮮豬糞施用總體上提高了整個(gè)培養(yǎng)時(shí)期土壤所檢測(cè)6種耐藥基因豐度，且促進(jìn)了整個(gè)培養(yǎng)過(guò)程tetM、tetO基因相對(duì)豐度的提高，而tetB、tetC、tetT、tetZ等4種耐藥基因相對(duì)豐度在不同培養(yǎng)時(shí)期分別表現(xiàn)為增增減減趨勢(shì)；高溫滅菌豬糞施用總體上提高了整個(gè)培養(yǎng)時(shí)期土壤tetM、tetO、tetT基因的豐

3、度，且提高了tetO基因的相對(duì)豐度，但對(duì)tetM、tetT基因的相對(duì)豐度沒(méi)有明顯影響；高溫滅菌豬糞施用總體上降低了整個(gè)培養(yǎng)時(shí)期土壤tetB基因的豐度及相對(duì)豐度。高溫滅菌豬糞施用降低了培養(yǎng)初期土壤tetC、tetZ基因的豐度及相對(duì)豐度，隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，tetC基因豐度及相對(duì)豐度始終低于CK，而tetZ基因豐度及相對(duì)豐度均有提升。(2)厭氣條件下，與CK相比，新鮮豬糞施用提高了整個(gè)培養(yǎng)時(shí)期土壤6種耐藥基因豐度及相對(duì)豐度；高溫滅菌豬糞施用總

4、體上提高了整個(gè)時(shí)期土壤tetM、tetO、tetT基因的豐度及相對(duì)豐度，tetB、tetC、tetZ基因的豐度及相對(duì)豐度均在培養(yǎng)初期低于CK，并且隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)逐漸提升。(3)無(wú)論是好氣還是厭氣條件下，與新鮮豬糞施用相比，高溫滅菌豬糞施用總體降低了各培養(yǎng)時(shí)期土壤tetB、tetC、tetM、tetO、tetT、tetZ基因豐度及相對(duì)豐度。(4)與好氣條件相比，厭氣條件有利于不同施肥處理土壤tetB、tetC、tetT基因豐度及相對(duì)豐度

5、的提高；厭氣條件下各處理土壤tetM、tetO基因豐度與好氣條件下基本一致，而相對(duì)豐度卻高于好氣培養(yǎng)土壤；厭氣條件抑制了tetZ基因豐度及相對(duì)豐度的提古同04、采用普通PCR技術(shù)對(duì)新鮮豬糞及各施肥處理土壤DNA提取樣本中具有外排泵機(jī)制(29種)、核糖體保護(hù)機(jī)制(11種)、修飾／鈍化機(jī)制(3種)及未知機(jī)制(1種)的共計(jì)44種四環(huán)素耐藥基因進(jìn)行了定性檢測(cè)，結(jié)果顯示：(1)外排泵機(jī)制與核糖體保護(hù)機(jī)制耐藥基因多樣性在各檢測(cè)樣本中較為普遍。(2)

6、由各樣本耐藥基因總檢出率可知，1)CK具有較豐富的耐藥基因多樣性；2)豬糞的施用大幅提高土壤中耐藥基因種類(lèi)的覆蓋率，其中，高溫處理豬糞施用與新鮮豬糞施用對(duì)土壤耐藥基因覆蓋率影響差異不明顯；(3)從耐藥機(jī)制類(lèi)型看，不同處理豬糞施用(A、B、C)分別使土壤外排泵機(jī)制耐藥基因覆蓋率提高了276％、241％、276％，核糖體保護(hù)機(jī)制均提高363％，而對(duì)修飾／鈍化機(jī)制與未知機(jī)制耐藥基因的覆蓋程度沒(méi)有影響。(4)比較各施肥處理土壤耐藥基因種類(lèi)發(fā)現(xiàn)：