膽紅素尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶1A1(UGT1A1)與原發(fā)性肝內(nèi)膽管結(jié)石關(guān)系的研究.pdf

1、目的:膽紅素葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶( Bilirubin UDP-glucuronsytransferase B-UGT)是膽紅素代謝的關(guān)鍵酶,其編碼基因?yàn)閁GT1A1。既往實(shí)驗(yàn)研究提示B-UGT活性降低可能是導(dǎo)致膽汁中單結(jié)合膽紅素增多,形成致石膽汁的重要原因。本實(shí)驗(yàn)觀察原發(fā)性肝內(nèi)膽管結(jié)石(Primary Intrahepatic Stones PIS)患者肝細(xì)胞內(nèi)膽紅素葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶基因UGT1A1 mRNA及其蛋白(B-UGT)表達(dá)

2、情況,在基因水平探索PIS的發(fā)病機(jī)理及調(diào)控機(jī)制
　　對(duì)象與方法:1、以肝內(nèi)膽管結(jié)石病患者肝臟為標(biāo)本,取33例肝內(nèi)膽管結(jié)石患者肝臟(HS組),其中男性患者19人,女性14人。15例非PIS患者肝臟(其中肝囊腫患者8人,肝血管瘤6人,肝癌1人,男性9人,女性6人)為對(duì)照組(NS組)。在術(shù)中將肝組織切下后,立即切除適當(dāng)大小裝入凍存管,急送瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室-80度保存。2、肝臟細(xì)胞內(nèi)UGT1A1基因mRNA表達(dá)量測(cè)定:以GAP

3、DH為內(nèi)參照,采用Real time PCR方法檢測(cè)(SYBR Green相對(duì)定量法)UGT1A1基因 mRNA的表達(dá)量。上游引物序列為TGCCCACTGTATTCTTCTTGC(5’-3’),下游引物序列為TTCTGTGAAAAGGCAATGAGC(5’-3’)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣本 PCR反應(yīng)Ct值,用Bio-Rad iQ5軟件分析計(jì)算mRNA表達(dá)量。3、UGT1A1基因蛋白(B-UGT)表達(dá)量的檢測(cè):以β-actin為內(nèi)參,抗體選擇

4、美國(guó)ABCAM公司產(chǎn)品UGT1A1(AB62600),采用Western blot法檢測(cè)上述基因所編碼蛋白表達(dá)量。圖像結(jié)果使用Bio-Rad凝膠攝像分析系統(tǒng)及Quantity One4.4.0軟件分析計(jì)算相關(guān)蛋白的表達(dá)量。檢測(cè)術(shù)前患者空腹12小時(shí)以上血清生化指標(biāo):總膽紅素、直接膽紅素、間接膽紅素、總膽固醇、甘油三酯、總膽汁酸、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白
　　結(jié)果:1、血清生化指標(biāo)分析:HS組血清總膽固醇、甘油三酯、總膽汁酸、高密度

5、低蛋白、低密度脂蛋白、總膽紅素、直接膽紅素、間接膽紅素均低于對(duì)照NS組,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2、HS組UGT1A1mRNA表達(dá)量為10.246±2.151,NS組為1.000±0.242,HS組UGT1A1mRNA表達(dá)量顯著高于對(duì)照組,t=2.89,P=0.018;3、HS組UGT1A1蛋白(B-UGT)表達(dá)量為1.059±0.232,NS組為0.835±0.007,HS組 UGT1A1蛋白(B-UGT)表達(dá)量高于對(duì)照組,t=2.487

6、,p=0.020。3、PIS患者UGT1A1基因 mRNA表達(dá)量與蛋白(B-UGT)表達(dá)量呈正相關(guān)(r=0.996, P=0.000),相關(guān)系數(shù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。血清膽固醇、總膽汁酸、總膽紅素、間接膽紅素、高密度脂蛋白以及低密度脂蛋白與 mRNA、蛋白(B-UGT)表達(dá)量呈負(fù)相關(guān),但相關(guān)系數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(r<0,P>0.05)。甘油三酯及直接膽紅素與mRNA及其蛋白(B-UGT)表達(dá)量呈正相關(guān),但相關(guān)系數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(r>0,P>0.05)