人胚食管上皮細胞永生化及其惡性轉化過程中的染色體異常研究.pdf

1、背景與目的:現(xiàn)已證實幾乎所有的人體惡性腫瘤都與染色體異常有關。因此,檢測食管癌的染色體異常有助于闡明食管癌的癌變機制。HPV18E6E7基因轉染人胚食管上皮細胞建立的永生化細胞株H5E973具有惡性變趨向,其61代細胞部分已惡性轉化。H5E973細胞株和在H5E973培養(yǎng)傳代后加入TPA誘導其惡性轉化而建立的瘤細胞株LTPA為體外研究食管癌癌變機制提供了理想模型。本課題以這2個細胞株為實驗對象,研究食管上皮細胞永生化及其惡性轉化過程中的

2、染色體變化規(guī)律,為進一步研究食管癌的分子細胞遺傳學異常提供有價值信息。
　　方法:體外傳代培養(yǎng)H5E973和LTPA細胞,制備其中期染色體,用胰酶-Giemsa法進行G顯帶。分析H5E97326、43、89代和LTPA63代的染色體眾數(shù)變化;對H5E97326、89代和LTPA63代進行G顯帶核型分析。此外,利用免疫組化和圖象分析技術檢測H5E97320、85代及LTPA74代細胞的HPV18E6、E7蛋白的表達情況。
　　

3、結果:H5E97326代、43代、89代眾數(shù)分別為56~62、58~63、61~64,LTPA63代眾數(shù)為59~64。H5E973和LTPA細胞主要以超二倍體,尤其是亞三倍體為主。伴隨傳代次數(shù)增加,H5E973細胞眾數(shù)右移,且亞三倍體也呈增多趨勢。12、14、17和20號染色體數(shù)目增加和Y染色體的丟失在H5E97326、89代和LTPA63代均頻繁出現(xiàn)。
　　在H5E973和LTPA主要發(fā)現(xiàn)了18個涉及1、2、4、5、6、7、8、

4、9、10、13、14、19和21號染色體的基本可辨認的結構異常。但在LTPA63代所分析的6個核型中卻未見到。
　　H5E97320、85代和LTPA74代均有HPV18E6、E7蛋白表達,但表達強度有所差異,其中E6、E7蛋白表達在H5E97385代的最強,在H5E97326代相對較弱。上述三代E7蛋白表達均強于E6蛋白。
　　結論:1.5E973、LTPA細胞主要以超二倍體、尤其是亞三倍體為主。H5E973細胞伴隨代數(shù)增

5、加出現(xiàn)染色體眾數(shù)右移和亞三倍體增多。
　　2.12、14、17和20號染色體數(shù)目增加和Y染色體的丟失在H5E97326、89代和LTPA63代均頻繁出現(xiàn),提示其可能與食管上皮細胞永生化和惡性轉化相關。
　　3.頻繁出現(xiàn)是H5E97326、89代及LTPA63代的共同特征,可能在食管上皮細胞永生化和惡性轉化中起重要作用。
　　4.der(9),t(9;9)( p24;q11)、der(9),t(9;9)(9qter→ c

6、en→9qter)、der(13),t(13;13)(13qter→cen→13qter)、del(6)(q21)、i(7p)和der(4),t(4;2)(q21;q12)由永生化階段至惡性轉化階段呈現(xiàn)進行性積累,推測上述異常染色體與食管上皮細胞的惡性轉化有關。
　　5.H5E97320代、85代、LTPA74代均有E6、E7蛋白表達,但表達強度有所差異。E6、E7蛋白的表達在H5E97385代最強。上述三代E7蛋白表達均強于E6