奧拉西坦在蛛網(wǎng)膜下腔出血中治療作用及機(jī)制探討.pdf

1、蛛網(wǎng)膜下腔出血（subarachnoidhemorrhage，SAH）是指各種原因引起腦血管突然的破裂，血液留至蛛網(wǎng)膜下腔的統(tǒng)稱，分自發(fā)性和外傷性兩類(lèi)，其中70％-80％的疾病屬于外科范疇。它并不是一種疾病，而屬于某些疾病的臨床癥狀。蛛網(wǎng)膜下腔出血后繼發(fā)腦血管痙攣發(fā)生率約為70％。如繼發(fā)有血管痙攣發(fā)生，則SAH后2周內(nèi)的死亡率較未發(fā)生血管痙攣者可增加1.5-3倍。影像學(xué)上表現(xiàn)腦動(dòng)脈狹窄及狹窄動(dòng)脈遠(yuǎn)端腦區(qū)的血流灌注減少，臨床亦有相應(yīng)的缺血

2、表現(xiàn)。而神經(jīng)細(xì)胞在腦血管痙攣后維持正常功能降低凋亡發(fā)生依賴于腦循環(huán)儲(chǔ)備力、腦代謝儲(chǔ)備力兩方面。目前臨床主要為尼莫地平抗血管痙攣及3H治療改善腦循環(huán)來(lái)降低死亡率；但在如何改善神經(jīng)細(xì)胞代謝方面來(lái)輔助治療降低神經(jīng)細(xì)胞壞死及凋亡方面尚缺少研究報(bào)道。奧拉西坦(Oxiracetam)ORC化學(xué)名為：2-（4-羥基吡咯烷-2-酮-1-基）乙酰胺，是一種新的環(huán)狀GABOB衍生物。是一種能夠促進(jìn)學(xué)習(xí)，增強(qiáng)記憶力，保護(hù)受損神經(jīng)細(xì)胞的新型中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物，可

3、選擇性的作用于大腦皮層和海馬激活保護(hù)或延伸神經(jīng)細(xì)胞的功能恢復(fù)，近十年來(lái)，國(guó)內(nèi)外應(yīng)用奧拉西坦治療各種病理狀態(tài)下的顱腦損傷，缺氧和慢性腦功能不全等取得了良好的療效。硼鹵神經(jīng)細(xì)胞的藥理作用被證實(shí)，闡明的作用機(jī)制包括以下幾方面：ORC通過(guò)血腦屏障對(duì)特異性中樞神經(jīng)通路發(fā)揮刺激作用，能有效提高大腦對(duì)氧的利用能力；促進(jìn)磷脂酰膽堿和磷脂酰乙酰胺的合成；激活腺苷酸激酶，使ATP合成增加，提高ATP轉(zhuǎn)化（即葡萄糖的代謝率），激活糖酵解，腦缺血時(shí)可增加葡萄糖

4、的利用，促進(jìn)腦細(xì)胞能量代謝，增加腦內(nèi)ATP形成及轉(zhuǎn)運(yùn)，提高腦細(xì)胞ATP/ADP的比值：降低腦血管阻力，抑制血小板聚集，改善微循環(huán)，增加腦組織血流量；促進(jìn)受損神經(jīng)細(xì)胞可塑性修復(fù)；降低興奮性氨基酸的神經(jīng)毒性作用。目前臨床上在蛛網(wǎng)膜下腔出血(subarachnoidhemorrhage，SAH)的治療中作為腦保護(hù)劑來(lái)改善預(yù)后常有應(yīng)用。多項(xiàng)研究表明了抑制凋亡便可以發(fā)揮腦保護(hù)作用，因此本研究通過(guò)建立大鼠SAH模型來(lái)觀測(cè)海馬神經(jīng)元凋亡情況，并探討奧

5、拉西坦對(duì)神經(jīng)元凋亡的影響，目的在于為臨床上防治SAH后的腦損傷提供理論依據(jù)。細(xì)胞凋亡是在細(xì)胞內(nèi)外特定的生理或病理性因素的誘導(dǎo)下發(fā)生細(xì)胞程序化的死亡。目前研究表明，細(xì)胞內(nèi)的基因控制著細(xì)胞凋亡的發(fā)生和發(fā)展。細(xì)胞外部因素通過(guò)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)來(lái)影響這些基因的表達(dá)或者其表達(dá)產(chǎn)物的活化，從而間接地調(diào)控細(xì)胞發(fā)生凋亡。有關(guān)凋亡機(jī)制的研究有很多，不同種類(lèi)、不同生長(zhǎng)發(fā)育階段的細(xì)胞有其不同的細(xì)胞凋亡路徑，但是這種不同主要表現(xiàn)在其早期誘發(fā)凋亡的分子機(jī)制有差別很大，但是

6、凋亡一起始，不同的早期凋亡信號(hào)都會(huì)匯集到一條共同的執(zhí)行路徑上，導(dǎo)致細(xì)胞產(chǎn)生相似的特征性的形態(tài)學(xué)和生化改變，而目前研究表明Caspase-3是Caspase家族中重要的一員，且被證實(shí)處于凋亡執(zhí)行通路的下游，是各種凋亡通路中的共同下游效應(yīng)部分，它直接或間接酶解一系列細(xì)胞存活所必需的功能蛋白，引起細(xì)胞凋亡。Bcl-2家族在神經(jīng)細(xì)胞的凋亡抑制過(guò)程中是一個(gè)重要的凋亡抑制基因，Bcl-2蛋白可以通過(guò)降低細(xì)胞內(nèi)及細(xì)胞核內(nèi)Bax的濃度，直接通過(guò)影響線粒

7、體外膜通透性的改變來(lái)阻止凋亡信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)。Bax是一種主要的促凋亡基因，其誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制是通過(guò)Bax同源二聚體的形成來(lái)完成，Bcl-2蛋白的抑制凋亡需要通過(guò)與Bax結(jié)合形成異源二聚體來(lái)實(shí)現(xiàn)，Bcl-2/Bax組成一個(gè)相對(duì)平衡體系，Bax過(guò)表達(dá)時(shí)就表現(xiàn)細(xì)胞凋亡加速，Bcl-2過(guò)表達(dá)時(shí)就表現(xiàn)細(xì)胞凋亡被抑制，Bcl-2/Bax的比率決定了細(xì)胞凋亡是否發(fā)生。其作用機(jī)制經(jīng)研究證實(shí)為Bax參與線粒體膜結(jié)構(gòu)的變化，并與Cyte-c的釋放相關(guān)密切。在凋亡

8、因素的刺激下，Cyte-c的釋放和分布受Bax等因素的調(diào)控。釋放入胞質(zhì)中的Cvte-c在ATP或dATP的輔助作用下引發(fā)Caspase家族的活化來(lái)誘導(dǎo)凋亡的發(fā)生。
　　 [方法]選擇成年雄性Wistar大鼠35只，采用新鮮自體股動(dòng)脈血枕大池二次注入法來(lái)建立大鼠SAH模型，將大鼠隨機(jī)分配為空白對(duì)照組、生理鹽水對(duì)照組、SAH組、奧拉西坦注射液治療1組、奧拉西坦注射液治療2組，每組7只，以上各組于術(shù)后14天處死，用Real-TimeP

9、CR技術(shù)檢測(cè)海馬神經(jīng)組織中凋亡因子Caspase-3和Bax以及抗凋亡因子Bcl-2在各組的變化情況，并用Westernblot進(jìn)一步來(lái)驗(yàn)證此變化。
　　 [結(jié)果]SAH后可引起海馬神經(jīng)組織中Caspase-3和Bax的表達(dá)較對(duì)照組均有不同程度上升（P＜0.01），同時(shí)Bcl-2表達(dá)也有所上升（P＜0.01），均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。奧拉西坦注射液治療1組及2組Caspase-3的表達(dá)較SAH組有下降（P＜0.01），奧拉西坦注射液治療