PTEN和MVD在口腔鱗癌中表達(dá)與生物學(xué)行為相關(guān)性研究.pdf

1、目的：口腔鱗癌(Oralsquamouscellcarcinoma，OSCC)是口腔最常見的惡性腫瘤，嚴(yán)重危害人類健康，但其發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制尚不清楚。同其它腫瘤一樣，口腔鱗癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多階段、多步驟漸進(jìn)演化的過程。已有的研究表明許多癌基因的激活及抑癌基因的失活參與了這一過程。PTEN(phosphataseandtensinhomologydeletedonchromosome10)基因是1997年發(fā)現(xiàn)的一種新的腫瘤抑制基因，其

2、功能十分復(fù)雜，具有參與胚胎正常發(fā)育，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，引起G1期細(xì)胞阻滯，抑制細(xì)胞遷移，鋪展和局部粘附功能，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用。新生血管可為腫瘤提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，刺激腫瘤的生長(zhǎng)，同時(shí)也是腫瘤播散轉(zhuǎn)移的前提，因此腫瘤血管的生成是腫瘤發(fā)生、發(fā)展的重要條件。在口腔鱗癌中PTEN能否通過調(diào)節(jié)血管的生成來抑制腫瘤，尚不十分明確。本實(shí)驗(yàn)主要通過對(duì)口腔鱗癌組織中PTEN蛋白和微血管密度(microvesseldensity,MVD)的檢測(cè)，旨

3、在從蛋白質(zhì)水平探討抑癌基因PTEN及MVD與口腔鱗癌發(fā)生和發(fā)展的關(guān)系及其作用機(jī)理，并進(jìn)一步分析二者之間的相關(guān)性，為口腔鱗癌的預(yù)防和治療提供新的方法；同時(shí)探討組織芯片在腫瘤研究中應(yīng)用的可行性。 方法：收集口腔鱗癌及相關(guān)組織手術(shù)切除標(biāo)本和相應(yīng)的臨床病理資料，分為五組：正?？谇徽衬ど掀?0例；口腔上皮單純性增生10例；口腔粘膜白斑15例(伴輕度不典型增生的7例、中度不典型增生的5例、重度不典型增生的3例)；口腔鱗癌72例(伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)

4、移的原發(fā)灶37例、不伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的原發(fā)灶35例)；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶37例。通過構(gòu)建組織芯片(tissuechips)結(jié)合免疫組織化學(xué)鏈霉菌抗生物素-過氧化物酶染色法(streptavidinproxidoseimmunohistochemistrymethod，SP法)檢測(cè)正常口腔粘膜上皮、口腔上皮單純性增生、口腔粘膜白斑和口腔鱗癌組織及相應(yīng)的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中PTEN蛋白和微血管密度(用CD34標(biāo)記)的表達(dá)情況，同時(shí)分析PTEN和MVD與臨

5、床病理參數(shù)的關(guān)系，并分析PTEN與MVD的相關(guān)性。結(jié)果用SPSS11.5forwindows統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析。PTEN蛋白陽性表達(dá)率的比較采用X2檢驗(yàn)；MVD用(-x)±s表示并采用t檢驗(yàn)分析；相關(guān)性分析采用Spearman's等級(jí)相關(guān)分析法分析，口腔鱗癌與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中PTEN的表達(dá)強(qiáng)度的比較采用配對(duì)樣本比較的Wilcoxon符號(hào)秩檢驗(yàn)，以P＜0.05作為差異有顯著性的標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果：(1)組織芯片蠟塊蠟質(zhì)細(xì)膩均勻，無開裂現(xiàn)象

6、，除一點(diǎn)略有移位外，可見163點(diǎn)整齊排列。切片經(jīng)染色后無脫片和扭曲，符合觀察的需要。(2)PTEN陽性部位在細(xì)胞核，呈黃色、棕黃色、黃褐色顆粒，其在正?？谇徽衬ぁ⒖谇簧掀渭冃栽錾?、口腔粘膜白斑(伴輕、中、中度不典型增生)、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的口腔鱗癌原發(fā)灶、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的口腔鱗癌原發(fā)灶及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)率分別為100％(10/10)、100％(10/10)、93.33％(14/15)、85.71％(30/35)、59.46％(22/37

7、)、35.14％(13/37)。很明顯，從正常口腔粘膜→口腔粘膜癌前病變→無轉(zhuǎn)移的口腔鱗癌→有轉(zhuǎn)移的口腔鱗癌→淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中，PTEN基因的表達(dá)呈逐漸降低趨勢(shì)。正?？谇徽衬そM與口腔粘膜癌前病變組比較，PTEN基因的表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=1.373，P=0.241＞0.05)；口腔粘膜癌前病變組與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的口腔鱗癌原發(fā)灶比較，PTEN基因的表達(dá)也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=0.577，P=0.447＞0.05)；但口腔粘膜癌前病變組與有淋巴

8、結(jié)轉(zhuǎn)移的口腔鱗癌原發(fā)灶比較，PTEN基因的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=5.749，P=0.016＜0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的原發(fā)灶比無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的原發(fā)灶中PTEN基因的表達(dá)率明顯降低(X2=6.180，P=0.013＜0.05)，而在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)率又比相應(yīng)的原發(fā)灶中的表達(dá)率進(jìn)一步降低(X2=4.391，P=0.036＜0.05)。PTEN的陽性表達(dá)率在不同性別、年齡、病程、腫塊大小、癌組織浸潤(rùn)深度和pTNM分期等臨床病理參數(shù)間無

9、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；但與口腔鱗癌的組織分化程度有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=17.214，P=0.000＜0.05)。(3)在正常口腔粘膜、口腔上皮單純性增生和口腔粘膜白斑組織中MVD值分別為46.50±3.81、47.30±5.29和49.27±3.15，在口腔鱗癌組織中MVD值為66.14±4.31，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t='21.50，P=0.000＜0.05)。很明顯，從正常口腔粘膜→口腔粘膜癌前病變→口腔鱗癌，MVD值呈逐漸增高趨

10、勢(shì)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組MVD值為67.62±4.03，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組MVD值為65.06±4.01，兩者間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-2.704，P=0.009＜0.05)。MVD值與性別、年齡、病程、腫塊大小、癌組織浸潤(rùn)深度和pTNM分期等臨床病理參數(shù)間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；(4)PTEN陽性組MVD值為65.69±4.09，顯著低于PTEN陰性組的MVD值68.15±4.04，二者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-2.291，P=0

11、.025＜0.05)。經(jīng)Spearman's相關(guān)性分析，PTEN與MVD二者呈負(fù)相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(rs=-0.371，P=0.001＜0.05)。 結(jié)論：(1)組織芯片具有高通量、高效率、節(jié)省試劑和時(shí)間等優(yōu)點(diǎn)，并且使各組織的實(shí)驗(yàn)條件相同，減少了實(shí)驗(yàn)誤差，在大樣本研究中具有明顯的優(yōu)勢(shì)。(2)PTEN蛋白在正?？谇徽衬?、口腔上皮單純?cè)錾⒖谇徽衬ぐ装呓M織中呈強(qiáng)陽性表達(dá)，在口腔鱗癌組織中表達(dá)減低，提示PTEN可能在口腔鱗癌的發(fā)生

12、發(fā)展中起著重要作用，并可能是口腔鱗癌組織細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的原因之一。(3)PTEN蛋白的表達(dá)與患者的性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小等臨床病理參數(shù)無相關(guān)性，但與口腔鱗癌的組織分化程度和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示PTEN有可能作為口腔鱗癌分級(jí)和臨床判斷患者預(yù)后的新的預(yù)示指標(biāo)。(4)MVD值在口腔鱗癌組織中明顯高于正?？谇徽衬?、口腔上皮單純?cè)錾涂谇徽衬ぐ装?，說明微血管的生成有利于腫瘤的生長(zhǎng)；MVD值與口腔鱗癌的病理分級(jí)、臨床分期等無關(guān)，但與淋巴結(jié)