油菜近等基因系鑒定及BnWRKY16、BnWRKY52功能初探.pdf

1、油菜是中國主要種植的油料作物，對我國國民經(jīng)濟(jì)的發(fā)展有著重要的作用，提高油菜的油分含量一直是油菜育種研究的首要任務(wù)。WRKY轉(zhuǎn)錄因子作為一種調(diào)控因子在植物調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中占據(jù)著重要地位，參與植物的生長發(fā)育、抗逆、抗病等一系列的調(diào)控過程。我們通過轉(zhuǎn)錄組測序和分析得到了兩個與含油量有關(guān)的WRKY轉(zhuǎn)錄因子BnWRKY52、BnWRKY16。本實(shí)驗(yàn)利用高代自交姐妹系構(gòu)建了兩個高含油量和中低含油量的近等基因系，并以這兩個近等基因系材料為基礎(chǔ)材料，初步研究

2、了BnWRKY52、BnWRKY16在油菜種子成熟與萌發(fā)過程中的表達(dá)情況。具體情況如下：
　　1.以NJ9高油品系為基礎(chǔ)材料，利用連續(xù)自交的方法構(gòu)建含油量差異的擬近等基因系。以來源于蕓薹屬Brassica DB公共數(shù)據(jù)庫的156對SSR引物對9個擬近等基因系株系材料進(jìn)行擴(kuò)增，篩選出32對條帶清晰、重復(fù)性好的引物用于近等性分析?；?2對SSR引物PCR擴(kuò)增結(jié)果，經(jīng)過遺傳相似性系數(shù)估算以及聚類分析鑒定近等基因系的近等性，結(jié)果顯示9個

3、候選株系材料遺傳相似性系數(shù)均在0.85到0.94之間，其中YC13-554和YC13-559的遺傳相似性系數(shù)最大為0.94，確定為近等基因系。而后對這兩個材料成熟期的農(nóng)藝性狀進(jìn)行調(diào)查，結(jié)果進(jìn)一步確定了YC13-554和YC13-559為高（中低）含油量近等基因系。
　　2.以含油量差異的近等基因系材料YC13-554和YC13-559為基礎(chǔ)材料，利用實(shí)時定量PCR的方法，檢測轉(zhuǎn)錄因子BnWRKY52、BnWRKY16在種子成熟過程

4、中的基因表達(dá)量。結(jié)果顯示，在種子成熟的不同時期BnWRKY52在油菜YC13-554和YC13-559中的表達(dá)均呈現(xiàn)上升趨勢，且在油菜YC13-559中表達(dá)量比在YC13-554中高；WRK Y16在油菜YC13-554和YC13-559的表達(dá)均只出現(xiàn)一個較大的表達(dá)峰，在油菜YC13-559中的表達(dá)峰出現(xiàn)早于油菜YC13-554中。據(jù)以上結(jié)果表明，轉(zhuǎn)錄因子WKY52和WRKY16與油菜油分合成的調(diào)控有關(guān)。為驗(yàn)證所得結(jié)果，選擇了三個已確定

5、的與油菜含油量有關(guān)的關(guān)鍵酶的基因二酰基甘油?；D(zhuǎn)移酶(DTAG)、乙酰輔酶A羧化酶、Wri1，檢測其表達(dá)量，并使BnWRKY52、BnWRKY16表達(dá)量與之進(jìn)行對比。結(jié)果顯示，兩者之間表達(dá)模式相似。
　　3.以近等基因系材料YC13-554和YC13-559為基礎(chǔ)材料，利用實(shí)時定量PCR技術(shù)檢測轉(zhuǎn)錄因子BnWRKY52、BnWRKY16在油菜種子萌發(fā)過程中的基因表達(dá)量。結(jié)果顯示，在種子萌發(fā)的不同時期，BnWRKY52、BnWRKY