抑癌基因AZGP1在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義和功能的初步研究.pdf

1、研究背景和目的：
　　 食管癌是我國(guó)最常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一,具有明顯的地區(qū)性分布差異,預(yù)后不佳。在我國(guó)食管癌死亡率高,并且病理類(lèi)型主要以鱗狀細(xì)胞癌為主。我國(guó)高發(fā)區(qū)主要集中在太行山脈區(qū)域的河南邊境、山西和河北交界區(qū)。發(fā)病率由高到低向四周放射狀。近年來(lái)隨著外科、放療和化療等多學(xué)科統(tǒng)合治療食管癌取得不少進(jìn)展,但其總體5年存活率仍較低。研究表明食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展與環(huán)境、生活習(xí)慣、營(yíng)養(yǎng)狀況等密切相關(guān)。涉及一個(gè)或者多個(gè)基因多階段、多步驟

2、的過(guò)程,其中癌基因的啟動(dòng)與抑癌基因的失活是非常重要的兩個(gè)方面,研究表明多個(gè)與腫瘤相關(guān)的基因也與食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。因此,研究與食管癌相關(guān)基因及其作用,對(duì)食管癌的診斷、治療及指導(dǎo)預(yù)后具有重要意義。
　　 為了研究河南林州市地區(qū)食管鱗癌的癌變及轉(zhuǎn)移相關(guān)因子,通過(guò)在林州市人民醫(yī)院收集了包含腫瘤和癌旁正常組織的石蠟包埋標(biāo)本299例,建立了一套包含臨床病理數(shù)據(jù)的食管鱗狀細(xì)胞癌的組織芯片。通過(guò)選取10對(duì)分別包含新鮮食管鱗癌和鄰近正常

3、食管上皮組織標(biāo)本,抽提RNA,并分別等量混勻在一起。采用cDNA芯片檢測(cè)表達(dá)譜并進(jìn)行比較,尋找到有表達(dá)差異的基因。
　　 通過(guò)基因的表達(dá)差異,發(fā)現(xiàn)腫瘤組織的AZGP1表達(dá)含量是其相應(yīng)鄰近組織的-3.3倍。其在腫瘤組織中表達(dá)明顯下調(diào)。AZGP1是一種可溶性糖蛋白,有很多文獻(xiàn)報(bào)道在腫瘤惡病質(zhì)患者中AZGP1高表達(dá),有些文獻(xiàn)報(bào)道其可以作為一種生物標(biāo)記,同時(shí)有報(bào)導(dǎo)在胰腺癌中表達(dá)是下降的。但未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)AZGP1在食管鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中

4、的作用。
　　 材料和方法:
　　 1.55例食管癌手術(shù)切除標(biāo)本取自河南省安陽(yáng)腫瘤醫(yī)院,HE切片病理證實(shí)為鱗狀細(xì)胞癌。所有病例術(shù)前均無(wú)化療、放療及免疫治療史。
　　 2.構(gòu)建食管癌組織芯片包括299例食管癌組織樣本,其中包括166名男性和133名女性患者；年齡從40歲至80歲,平均年齡為59.8歲。其中Ⅰ期病人12名,ⅡA期病人145名,ⅡB期病人30名,Ⅲ期病人98名,Ⅳ期病人9名,其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病人135

5、名,原位癌5名。腫瘤的分級(jí)根據(jù)WHO分級(jí)標(biāo)準(zhǔn),TNM分期參照UICC第6版TNM的分期標(biāo)準(zhǔn)(2002年)。
　　 3.通過(guò)RT-PCR方法檢測(cè)55例食管鱗狀細(xì)胞癌組織及其對(duì)應(yīng)正常的癌旁組織中AZGP1mRNA的表達(dá)情況。免疫組化方法檢測(cè)食管癌組織芯片中AZGP1蛋白表達(dá)差異。
　　 4.將AZGP1基因克隆并連接到載體pcDNA3.1(+)并轉(zhuǎn)染到表達(dá)缺失的細(xì)胞株KYSE30。RT—PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染KYSE30細(xì)胞中AZG

6、P1mRNA表達(dá)情況；western-blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染KYSE30細(xì)胞中AZGP1蛋白表達(dá)情況。
　　 5.細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、裸鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)研究AZGP1對(duì)食管癌細(xì)胞株的抑瘤能力研究。
　　 6.通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)了解AZGP1對(duì)于細(xì)胞遷移能力的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1.AZGP1基因在55例食管鱗癌標(biāo)本中mRNA表達(dá)情況,AZGP1在食管鱗癌組織中表達(dá)缺失率為69.09％(38／55).免疫

7、組化在蛋白質(zhì)水平上檢測(cè)臨床病理標(biāo)本發(fā)現(xiàn)食管鱗癌中低表達(dá)或不表達(dá)率為70.4％(202／287),在所有正常鱗狀上皮組織中高表達(dá)。與腫瘤分化、腫瘤分期密切相關(guān)。
　　 2.AZGP1表達(dá)與臨床預(yù)后密切相關(guān)。
　　 3.細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、裸鼠體內(nèi)荷瘤實(shí)驗(yàn)等均證明AZGP1能抑制ESCC細(xì)胞的成瘤能力。
　　 4.劃痕實(shí)驗(yàn)證明AZGP1能夠抑制腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲。
　　 5.免疫印記提示AZGP1