Twist-1 基因表達(dá)在食管鱗狀細(xì)胞癌中的臨床病理學(xué)意義.pdf

1、目的：應(yīng)用RNAi，Western blot，Real-time PCR，MS-PCR和免疫組化等方法研究Twist-1基因蛋白表達(dá)在食管鱗狀細(xì)胞癌（Esophageal Squamous Cell Carcinoma，ESCC）中的臨床病理學(xué)意義。
　　材料和方法：食管鱗狀細(xì)胞癌（ESCC）167例及正常食管組織34例共201例病理組織標(biāo)本選自韓國三星醫(yī)療中心病理科1995-2008年的存檔蠟塊標(biāo)本。所有標(biāo)本均制作成組織芯片（T

2、MA，tissue microarray）。另外，我們選擇近幾年已發(fā)表論文中最常使用的幾種Twist抗體，應(yīng)用RNAi技術(shù)、Western blot和免疫細(xì)胞化學(xué)方法在10種胃癌細(xì)胞株中進(jìn)行Twist-1蛋白表達(dá)的對(duì)比檢測，從而篩選出特異性最好的抗體應(yīng)用于上述食管病變蠟塊標(biāo)本的免疫組化染色，同時(shí)進(jìn)行Real-time PCR和 Twist-1基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化（Methylation Specific PCR，MS-PCR）檢測，探討

3、Twist-1基因和蛋白在 ESCC患者中的表達(dá)情況，并分析其臨床病理學(xué)意義及其機(jī)制。
　　結(jié)果：與其它Twist抗體比較，單克隆抗體Twist2C1a(ab50887)具有背景染色少、抗原特異性高的特點(diǎn)，因此是比較可靠的Twist-1抗體。單克隆抗體Twist2C1a（ab50887）蛋白免疫組化染色結(jié)果表明，Twist-1蛋白陽性表達(dá)部位主要是食管鱗癌細(xì)胞核，Twist-1蛋白在食管鱗癌中的陽性表達(dá)率較高（86/167，51.

4、5％），而在正常食管鱗狀上皮組織中則較低（9/34，26.5%），且差異具有顯著性（p=0.008<0.01）。對(duì)ESCC患者的臨床病理學(xué)數(shù)據(jù)的分析結(jié)果表明，Twist-1蛋白過表達(dá)預(yù)示食管鱗癌患者的不良預(yù)后，即5年生存率明顯降低，在 Cox-比例風(fēng)險(xiǎn)模型統(tǒng)計(jì)單變量（RR=3.019，p=0.000）和多變量（RR=3.131，p=0.000）分析中均有意義。但與患者年齡、性別、腫瘤大小、分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、癌細(xì)胞分化情況以及放化療等

5、不相關(guān)（p>0.05）。另外，根據(jù)免疫組化染色結(jié)果選取Twist-1蛋白高表達(dá)和低表達(dá)食管鱗癌蠟塊組織各7例以及正常食管鱗狀上皮蠟塊組織5例，應(yīng)用Real-time PCR檢測標(biāo)本的mRNA表達(dá)水平，結(jié)果表明各病例中的mRNA表達(dá)水平與免疫組化結(jié)果相一致，即免疫組化Twsit-1蛋白過表達(dá)病例，其mRNA表達(dá)水平也明顯增高。同樣，MS-PCR結(jié)果也證明，Twist-1蛋白低表達(dá)病例表現(xiàn)為Twist-1基因啟動(dòng)子區(qū)的高度甲基化，而Twis