納米羥基磷灰石懸浮液對人牙周膜成纖維細胞增殖及細胞周期影響的研究.pdf

1、目的：
　　 1、初步探討納米羥基磷灰石懸浮液對人牙周膜成纖維細胞的作用,為納米羥基磷灰石應用于牙周病的治療提供依據(jù)。
　　 2、為本課題組今后研究納米及介孔材料載藥后對相關成纖維細胞的凋亡影響做準備。
　　 方法：
　　 1.利用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)、鑒定并傳代人牙周膜成纖維細胞,利用第4～6代成纖維細胞進行實驗。
　　 2.實驗室制備納米羥基磷灰石,利用羧甲基纖維素鈉、六偏磷酸鈉作為分散劑,進行對

2、比,觀察兩種分散劑對納米羥基磷灰石的分散效果,并進行簡單的細胞培養(yǎng),對比細胞生長情況,選擇合適的分散劑。
　　 3.采用分散劑對納米羥基磷灰石進行分散,制備1％濃度的納米羥基磷灰石懸浮液,分別稀釋至0.5％、0.25％、0.1％、0.05％、0.025％,并設置單獨0.1％濃度的納米羥基磷灰石組、單獨0.1％濃度的羧甲基纖維素鈉組、0.005％介孔硅組、0.01％氫氧化鈣組及空白對照組,對人牙周膜成纖維細胞各培養(yǎng)24h、48h、

3、72h后,用MTT法對各組細胞增殖情況進行測定,評價各組對人牙周膜成纖維細胞增殖的影響。
　　 4.選取0.5％濃度的懸浮液與各對照組繼續(xù)細胞培養(yǎng)48h,將各組培養(yǎng)后的細胞,采用流式細胞術檢測細胞周期分布情況,分析各組對人牙周膜成纖維細胞的細胞周期影響。
　　 結果：
　　 1.成功培養(yǎng)出人牙周膜成纖維細胞,經(jīng)抗波形幺幺蛋白、抗角蛋白染色確定:抗波形幺幺蛋白陽性,抗角蛋白陰性。
　　 2.實驗室采用化學沉

4、淀法制備出納米羥基磷灰石,經(jīng)粒徑檢測所得納米弳基磷灰石粒徑在20-40 nm符合本次實驗所需。通過比較六偏磷酸鈉和羧甲基纖維素鈉的對納米羥基磷灰石的分散效果,可以得出六偏磷酸鈉能更好地分散納米羥基磷灰石,但進行細胞培養(yǎng)時,采用六偏磷酸鈉分散納米羥基磷灰石進行培養(yǎng)卻導致了大量人牙周膜成纖維細胞的死亡,而羧甲基纖維素鈉分散的納米羥基磷灰石組細胞生長良好。因此選用羧甲基纖維素鈉作為分散劑配置納米羥基磷灰石懸浮液,進行后續(xù)實驗。
　　

5、3.MTT法檢測不同濃度的分組以及多重對照組的細胞增殖情況,發(fā)現(xiàn)0.5％濃度的納米羥基磷灰石懸浮液組對細胞增殖情況較其他組效果明顯。在相同濃度(0.1％)下,納米羥基磷灰石懸浮液組對細胞的增殖作用優(yōu)于單獨納米羥基磷灰石組。
　　 4.采用流式細胞術檢測結果顯示納米羥基磷灰石懸浮液組可以減少處于G0/G1期的細胞數(shù)量,增加處于S期的細胞數(shù)量,使人牙周膜成纖維細胞在細胞增殖周期中很快完成G0/G1期向S的過渡。
　　 結論：

6、
　　 1.納米羥基磷灰石懸浮液對人牙周膜成纖維細胞的增殖有明顯的促進作用。在細胞培養(yǎng)允許的滲透濃度內,濃度越高對細胞增殖的促進作用越明顯,而且納米羥基磷灰石對人牙周膜成纖維細胞增殖的促進作用在前24h最為明顯。
　　 2.納米羥基磷灰石懸浮液作用于人牙周膜成纖維細胞,可以縮短細胞處于G0/G1的時間,使較大量的細胞進入S期,進行有絲分裂,加速了HPDLCs的增殖速度。
　　 3.通過本研究,進一步肯定了nHA運