過氧化物酶增殖物激活受體基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓相關(guān)性研究.pdf

1、目的：原發(fā)性高血壓(primaryhypertension)的病因為多因素，可分為遺傳因素和環(huán)境因素兩個方面，二者相互作用導(dǎo)致原發(fā)性高血壓病的發(fā)生。過氧化物酶增殖物激活受體(peroxisomeproliferatorsactivatedreceptor，PPAR)是一類配體激活依賴的轉(zhuǎn)錄因子，是甾體激素核內(nèi)受體超家族的新成員，已明確的PPAR亞型有三種，分別稱為PPARα、PPARδ(或PPARβ)、PPARγ，三種亞型的特異性配基和

2、組織分布有所不同。由PPAR參與介導(dǎo)的生物學(xué)效應(yīng)主要包括：脂類代謝，糖類代謝，炎癥反應(yīng)，免疫反應(yīng)，與細胞分化、生長和凋亡的關(guān)系，脂蛋白代謝，凝血異常和內(nèi)皮損傷等。臨床上一些常見疾病包括動脈粥樣硬化(AS)、肥胖、糖尿病(DM)、腫瘤以及炎癥性疾病等的發(fā)生發(fā)展與PPAR有密切關(guān)系。因此，從基因水平上，探討PPAR與原發(fā)性高血壓之間的關(guān)系，對于判斷原發(fā)性高血壓病易感性以及基因治療應(yīng)用方面，都具有重要指導(dǎo)意義和臨床實用價值。本實驗采用病例—對

3、照研究，選取原發(fā)性高血壓病患者137例，正常健康對照125例作為研究對象，檢測相關(guān)生化指標、收集一般臨床資料，研究PPARγC161→T、PPARδ+294T/C兩個基因位點堿基突變引發(fā)的基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓發(fā)病之間的關(guān)系。 方法：從北方漢族人群中選取原發(fā)性高血壓患者137例(EH組)，其中男性60例，女性77例，平均年齡為61.98歲(48-75歲)，入選標準嚴格按照1999年WHO/ISH指南的標準：1)有明確原發(fā)性高血

4、壓病史并且已服用抗高血壓藥物治療者；2)未服用抗高血壓藥物，且非同日2次測得收縮壓≥140mmHg和/或舒張壓≥90mmHg，排除繼發(fā)性高血壓、糖尿病、冠心病、高脂血癥及嚴重肝腎功能障礙病史者。正常對照組125例(NEH組)，男性54例，女性71例，平均年齡為62.06歲(49-72歲)。其入選者為不滿足上述原發(fā)性高血壓病入選標準，且無高血壓家族史，排除糖尿病、冠心病、高脂血癥及肝腎功能障礙病史者。入選的各個研究對象之間無親緣關(guān)系。

5、 登記每個研究對象的一般臨床資料并檢測相關(guān)生化指標，包括：性別、年齡、家族史、吸煙史、病程、收縮壓(DBP)、舒張壓(SBP)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)。所有研究對象需空腹12小時以上，于清晨取坐位采血，采集肘正中靜脈血。各血樣按相應(yīng)生化指標檢測要求做預(yù)處理：離心、分離上清，置-80℃超低溫冰箱保存等，待標本收集完全后同批測定，以減小批間誤差。用含有抗凝劑的

6、真空抽血管另外抽2ml靜脈血，充分混勻后置于-80℃超低溫冰箱凍存，用于基因組DNA的提取。 基因組DNA的提取采用傳統(tǒng)的酚/氯仿抽提法，試劑主要有：磷酸緩沖溶液(PBS)、蛋白酶K、抽提buffer、Tris飽和酚、氯仿、異戊醇、無水乙醇、TE等。其他實驗試劑和儀器有：聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)引物(上海英駿生物公司合成)、dNTPs、100bpDNAmarker、TaqplusDNA聚合酶，Promage瓊脂糖(北京鼎國生物公司

7、)，限制性內(nèi)切酶BbrpI(目本東洋紡公司)，限制性內(nèi)切酶Bsll(Biolab生物公司)，TGRADIENT基因擴增儀(Biometra公司)，TanonGis-1000凝膠成像系統(tǒng)(上海天能生物公司)等。 所有數(shù)據(jù)輸入SPSS10.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計分析?；蝾l率采用基因計數(shù)法，等位基因頻率比例用卡方檢驗，計量資料用均數(shù)±標準差表示，兩組間比較使用t檢驗，分類計數(shù)資料比較使用卡方檢驗；P＜0.05認為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

8、 結(jié)果：1.一般臨床資料及生化指標比較(table1)：兩組間在性別、年齡構(gòu)成上差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；TG、TC、HDL-C、LDL-C差異同樣不具有統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)；兩組間在DBP、SBP構(gòu)成上差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。 2.經(jīng)卡方檢驗各組基因型分布均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律(P＞0.1)，說明該研究人群具有代表性。 3.兩組間PPARγC161→T基因型分布頻率差

9、異有顯著性(P＜0.05)，等位基因分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)(table2)。 4.兩組間PPARδ+294T/C基因型分布頻率、等位基因分布頻率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)(table3)。 結(jié)論：PPARγC161→T的置換與原發(fā)性高血壓病之間有明顯的相關(guān)性，具有統(tǒng)計學(xué)意義，與C等位基因攜帶者相比，T等位基因攜帶者可以明顯減少罹患原發(fā)性高血壓病的風險，該保護作用有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；而PPAR