乳腺癌患者腫瘤負(fù)荷狀態(tài)與幼稚型Treg之間相關(guān)性分析.pdf

1、背景：
　　乳腺癌是女性常見惡性腫瘤之一，在發(fā)達(dá)國家和中國的上海、北京等大城市中，乳腺癌已位列女性癌癥發(fā)病率首位。全球每年乳腺癌發(fā)病人數(shù)超過120萬，死亡約30萬，嚴(yán)重威脅廣大婦女健康。
　　近年來在腫瘤免疫方面的一大突破是研究人員檢測到腫瘤患者血液及瘤體組織中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（RegulatoryT Cell，Treg）的數(shù)量明顯高于正常人，揭示了腫瘤微環(huán)境的免疫抑制性本質(zhì)。Treg細(xì)胞已由一個正常機(jī)體的保護(hù)者變節(jié)成了癌腫的免

2、疫屏障，導(dǎo)致殺傷細(xì)胞（CD8+T細(xì)胞等）無力清除腫瘤細(xì)胞。因此，靶向Treg細(xì)胞的療法已成為腫瘤免疫治療的重要研究方向。
　　目前對Treg的不同亞型的分類研究層出不窮，但目前尚不清楚其具體“分工”以及是否具有除目前發(fā)現(xiàn)之外的功能。Valmori等人報道了成年人外周血中Treg亞型的鑒定與功能分析，確定了CD4+CD25+ CCR7+CD62L+CTLA-4+ Foxp3+CD45RA+/RO-幼稚亞型Treg的存在。Nabila

3、 seddiki等人進(jìn)一步報道了幼稚型Treg的存在與功能，幼稚型CD45RA+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與記憶型調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在外周血、淋巴結(jié)、脾臟中的存在，并且幼稚型CD45RA亞型表達(dá)CTLA-4、轉(zhuǎn)錄因子Foxp3、T-bet以及GATA3，而且具有免疫抑制活性。此外，文獻(xiàn)報道，nTreg細(xì)胞在轉(zhuǎn)錄因子啟動子區(qū)的甲基化程度與未分化的幼稚型T細(xì)胞(na(i)ve T cell)非常接近。
　　實驗?zāi)康模?br>　　1.驗證幼稚型Treg細(xì)胞

4、是否存在于腫瘤患者體內(nèi)，且隨著腫瘤發(fā)生發(fā)展產(chǎn)生數(shù)量相應(yīng)變化。
　　2.明確在手術(shù)、化療治療過程中，患者外周血中幼稚型Treg細(xì)胞與腫瘤負(fù)荷狀態(tài)的相關(guān)性。
　　方法：
　　本研究收集20名健康志愿者和70例早期乳腺癌患者的血樣和新鮮腫瘤組織標(biāo)本。所有患者均接受手術(shù)治療和術(shù)后輔助化療。健康人體檢時，患者術(shù)前、術(shù)后和每周期化療前后采集外周靜脈血，分離得到外周血單個核細(xì)胞。通過B超引導(dǎo)穿刺活檢或乳腺癌手術(shù)獲取乳腺癌患者腫瘤原位

5、組織，通過原代培養(yǎng)技術(shù)獲取腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞。利用幼稚型T細(xì)胞的表型標(biāo)記:CD45RA和CD62L，通過免疫熒光抗體染色技術(shù)，最終經(jīng)過流式細(xì)胞儀分析得到CD4+CD25highCD45RA+或CD4+CD25highCD62L+兩種幼稚型Treg在健康人外周血，患者腫瘤原位、手術(shù)前后和輔助化療期間外周血中占淋巴細(xì)胞的比例變化。同時探究不同乳腺癌患者的不同臨床表型對其外周血幼稚型Treg細(xì)胞數(shù)目的差異影響。
　　結(jié)果：
　　1.

6、乳腺癌患者外周血CD45RA和CD62L兩種幼稚型Treg比例明顯高于健康人的比例。
　　2.乳腺癌患者腫瘤原位的CD45RA和CD62L兩種幼稚型Treg均明顯高于患者外周血中幼稚亞型的比例。
　　3.乳腺癌患者手術(shù)后CD45RA幼稚型Treg比例較術(shù)前明顯降低。
　　4.在術(shù)后輔助化療期間CD45RA和CD62L兩種幼稚型Treg均下降，在化療早期的療程中下降明顯，在最后幾個療程中保持在相對穩(wěn)定水平。
　　5

7、.臨床分期較晚的患者CD45RA和CD62L兩種幼稚型Treg比例均比臨床分期早的患者高;而Her-2型分子分型的患者兩種幼稚型Treg比例較Luminal A、Luminal B分子分型的患者高;Ki-67水平高的患者者CD45RA和CD62L兩種幼稚型Treg的比例均比Ki-67的患者高。
　　結(jié)論:
　　1.幼稚型的Treg細(xì)胞存在于腫瘤患者體內(nèi)，無論在腫瘤原位還是外周血均高于健康人，而且腫瘤患者腫瘤原位幼稚型的Tre