DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑的篩選及兩種化合物的酶活抑制機(jī)制、抗腫瘤活性研究.pdf

1、本研究首先建立以DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶為靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物體外篩選模型，利用該模型對(duì)不同來(lái)源的34個(gè)化合物進(jìn)行了DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑的篩選。結(jié)果發(fā)現(xiàn)釩配合物2號(hào)(LMC)、7號(hào)、15號(hào)、22號(hào)，喜樹(shù)堿衍生物cpt、cpt-O和海洋天然產(chǎn)物SAD具有DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I(Topo-I)的抑制作用。 本研究選取作用較強(qiáng)的釩配合物L(fēng)MC和7號(hào)化合物對(duì)其抑制Topo-I活性的分子機(jī)制作了進(jìn)一步的探討。LMC和7號(hào)化合物抑制Topo-I的半數(shù)抑制

2、濃度(IC<,50>)分別為16.5μM和8.6μM，均低于羥基喜樹(shù)堿(OPT)21.8μM，在實(shí)驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)LMC和7號(hào)化合物不能形成Drug-DNA-Fopo-I斷裂復(fù)合物；彗星電泳實(shí)驗(yàn)中，也沒(méi)有發(fā)現(xiàn)LMC和7號(hào)化合物對(duì)DNA損傷而產(chǎn)生的彗星現(xiàn)象，而OPT則有明顯的彗星現(xiàn)象。表明LMC和7號(hào)化合物與經(jīng)典Topo-I抑制劑羥基喜樹(shù)堿的作用機(jī)制不一樣。 電泳遷移率變動(dòng)分析(EMSA)進(jìn)一步表明LMC和7號(hào)化合物可以抑制1bpo-I

3、與DNA的結(jié)合；在EB取代實(shí)驗(yàn)中，LMC和7號(hào)化合物可以置換出EB，插入DNA雙鏈中。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明LMC和7號(hào)化合物可以插入DNA雙鏈中，推論LMC和釩7號(hào)化合物可能是通過(guò)插入DNA雙鏈，引起DNA的構(gòu)象變化從而阻礙Topo-I與DNA的結(jié)合，進(jìn)而發(fā)揮抑制1bpo-I活性的作用。 在上述工作基礎(chǔ)上，采用MTT法、流式細(xì)胞術(shù)分別于細(xì)胞及動(dòng)物水平觀察了LMC和釩7號(hào)配合物的抗腫瘤作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，LMC對(duì)多種腫瘤細(xì)胞株A549、H

4、ela、BEL-7402具有明顯抑制生長(zhǎng)的作用，最小IC<,50>值為4.2±0.8μM，且可將細(xì)胞阻斷在G2／M期，呈劑量依賴性，而對(duì)正常細(xì)胞株L-02生長(zhǎng)無(wú)明顯抑制作用；釩7號(hào)化合物同樣具有顯著抑制多種腫瘤細(xì)胞株A549、Hela、BEL-7402和P388生長(zhǎng)的作用，最小IC<,so>值為0.1±0.04uM，對(duì)正常細(xì)胞株L-02的抑制作用較弱，流式結(jié)果表明其可顯著引起A549細(xì)胞死亡；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，LMC能顯著抑制Lewis肺癌