暴露亞中毒閾劑量毒死蜱對(duì)新生鼠中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元線粒體的影響.pdf

1、本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，新生SD大鼠暴露亞中毒閾劑量毒死蜱后，小膠質(zhì)細(xì)胞被激活，并持續(xù)到SD大鼠青春期，且在青春期和成年期多巴胺能神經(jīng)元受損傷。已有多項(xiàng)研究表明小膠質(zhì)細(xì)胞的激活可能介導(dǎo)或參與了多巴胺能神經(jīng)元的損傷。以上研究提示我們，暴露亞中毒閾劑量毒死蜱的SD大鼠在其新生期已經(jīng)存在多巴胺能神經(jīng)元損傷的潛在因素。課題組前期研究還發(fā)現(xiàn)新生SD大鼠暴露亞中毒閾劑量毒死蜱，腦勻漿超氧化物岐化酶含量減少，丙二醛含量及腦蛋白羰基表達(dá)增高，提示腦組織氧

2、化應(yīng)激可能參與了毒死蜱神經(jīng)毒作用。氧化應(yīng)激是由于機(jī)體高活性分子如氧自由基(reactive oxygen species，ROS)等產(chǎn)生過多、超過了機(jī)體清除能力而產(chǎn)生。而ROS的產(chǎn)生主要來源于線粒體，當(dāng)線粒體損傷時(shí)，ROS產(chǎn)生增多，同時(shí)線粒體本身又是ROS氧化損傷的靶點(diǎn)，如此可形成線粒體損傷的惡性循環(huán)。所以，本課題在以上研究的基礎(chǔ)上提出假設(shè)，亞中毒閾劑量毒死蜱可致新生SD大鼠中腦黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元線粒體損傷。
　　 目的：探討新生

3、SD大鼠暴露亞中毒閾劑量毒死蜱(Chlorpyrifos，CPF)對(duì)中腦黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元線粒體的影響
　　 方法：新生11-14天SD大鼠85只，隨機(jī)分組為毒死蜱組(CPF組，n=29)和對(duì)照組(n=56)。對(duì)照組又分為溶劑二甲亞砜對(duì)照組(DMSO組，n=29)和生理鹽水對(duì)照組(NS組，n=27)。按照課題組前期方法建立新生SD大鼠暴露亞中毒閾劑量毒死蜱的動(dòng)物模型。動(dòng)物在注藥完畢后24h、72h、6d處死。①用免疫組化法和Wes

4、ternBlotting法檢測(cè)中腦黑質(zhì)線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ亞基1(NADHdehydrogenase subunit1，ND1)；②免疫組化法檢測(cè)中腦黑質(zhì)細(xì)胞色素C(Cytochrome C，Cyt C)；③在72h隨機(jī)取毒死蜱組、二甲亞砜對(duì)照組中腦黑質(zhì)用醋酸鈾、硝酸鉛雙重染色法電鏡觀察線粒體超微結(jié)構(gòu)變化；④在72h隨機(jī)取毒死蜱組、二甲亞砜對(duì)照組中腦黑質(zhì)用免疫組化染色后透射電鏡下觀察染色酪氨酸羥化酶(TyrosineHydroxylas

5、e，TH)陽性細(xì)胞線粒體超微結(jié)構(gòu)變化。所有數(shù)據(jù)用均值士標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，所有資料采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。
　　 結(jié)果：⑴線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ亞基1即ND1表達(dá)有變化，毒死蜱組和對(duì)照組比較，表達(dá)明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；毒死蜱組各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)無明顯差異，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。⑵線粒體呼吸鏈Cyt C表達(dá)有變化，毒死蜱組與對(duì)照組在72h、6d時(shí)間點(diǎn)上比較，表達(dá)增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

6、(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)組表達(dá)隨著各時(shí)間點(diǎn)的遞增而遞增，呈時(shí)間依賴性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。⑶醋酸鈾、硝酸鉛雙重染色法電鏡下可見毒死蜱組多巴胺能神經(jīng)元水腫，胞質(zhì)內(nèi)容稀少，其內(nèi)線粒體少見并水腫，有空泡形成；而二甲亞砜對(duì)照組多巴胺能神經(jīng)元無水腫，胞質(zhì)內(nèi)容豐富，其內(nèi)線粒體較多，形態(tài)基本正常，呈桿狀和粒狀，無水腫及空泡形成。⑷TH免疫組織化學(xué)染色后電鏡下可見毒死蜱組陽性細(xì)胞(即多巴胺能神經(jīng)元)內(nèi)線粒體明顯水腫，有大量空泡形成，數(shù)量較少