含塞姆利基森林病毒復(fù)制子的HIV多表位核酸疫苗的構(gòu)建與表達(dá).pdf

1、獲得性免疫缺陷綜合征(Acquired imunodeficiency syndrome，AIDS)即艾滋病，是由人免疫缺陷病毒(Human imminunodeficiency virus，HIV)感染引起的一種惡性傳染病。自從1981年在美國首次發(fā)現(xiàn)該病以來，全球已有6 500多萬感染病例，艾滋病還在以驚人的速度蔓延著，嚴(yán)重威脅人類的健康。HIV基因高度變異，逃避免疫監(jiān)視，使得傳統(tǒng)疫苗較難產(chǎn)生有效的免疫保護(hù)。核酸疫苗是從基因治療領(lǐng)域

2、發(fā)展起來的一種全新的免疫防治劑，可同時誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答和體液免疫應(yīng)答，安全性好，構(gòu)建靈活，成為一種非常有希望的艾滋病候選疫苗。 pSFV1載體為衍生于塞姆利基森林病毒(Semliki forest virus，SFV)RNA復(fù)制子的真核表達(dá)載體，但此載體系統(tǒng)應(yīng)用時需在體外將質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)錄成RNA，操作很不方便，限制了其廣泛應(yīng)用。為此，本研究通過分子克隆技術(shù)，將SFV的復(fù)制子插入到真核表達(dá)載體pIRESneo 的CMVie立即早期

3、啟動子和腺苷酸轉(zhuǎn)錄終止信號Poly(A)之間，構(gòu)建了含塞姆利基森林病毒復(fù)制子的DNA表達(dá)載體pCS，改造后的載體可按常規(guī)DNA疫苗的方式進(jìn)行制備、免疫，克服了原載體pSFV1體外轉(zhuǎn)錄制備RNA的弊端。將增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)基因片段插入到pCS載體多克隆位點(diǎn)中，得到pCS-EGFP，用其轉(zhuǎn)染BHK-21細(xì)胞，熒光顯微鏡下能觀察到EGFP的表達(dá)產(chǎn)物增強(qiáng)型綠色熒光蛋白，表明該新型表達(dá)載體可以用于表達(dá)外源基因。 為了探討此新型

4、載體pCS用于研制抗病毒疫苗的可能性，本研究選擇HIV優(yōu)勢抗原表位，以HIV-1表位基因?yàn)榛A(chǔ)，對抗原基因進(jìn)行人工分子設(shè)計，將HIV多表位基因(Multiple-epitope gene，MEG)與HIV-1巨分子顆粒p24進(jìn)行嵌合。從已構(gòu)建保存的pVAX1-MEGp24酶切下HIV嵌合多表位MEGp24基因，克隆到pCS表達(dá)載體中，成功構(gòu)建了含塞姆利基森林病毒復(fù)制子的HIV多表位核酸疫苗pCS-MEGp24。間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)