腺病毒介導(dǎo)hIL-10基因轉(zhuǎn)染聯(lián)合IFN-γ抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖及其機(jī)制的研究.pdf

1、白細(xì)胞介素(interleukin,IL)-10和γ干擾素(interferon-γ，IFN-γ)在一定條件下都可以抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖，但I(xiàn)L-10在體內(nèi)抑制IFN-γ的產(chǎn)生，削弱IFN-γ的作用，因此設(shè)想應(yīng)用IL-10時(shí)補(bǔ)充外源性IFN-γ。本研究構(gòu)建IL-10的重組腺病毒載體，以腺病毒介導(dǎo)方式給藥，觀察體外實(shí)驗(yàn)的效果。本課題包括三部分： 第一部分從體外培養(yǎng)的外周血單個(gè)核細(xì)胞克隆人白細(xì)胞介素-10cDNA。目的：從體外培養(yǎng)

2、的外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheralbloodmononuclearcells，PBMCs)克隆人白細(xì)胞介素(humaninterleukin,hIL)-10cDNA，為亞克隆及基因治療研究奠定基礎(chǔ)。結(jié)論：從PBMC中擴(kuò)增hIL-10cDNA，克隆至pUCm-T載體，方法較為簡(jiǎn)便，為進(jìn)一步進(jìn)行亞克隆及表達(dá)研究提供了可靠的前提條件。 第二部分細(xì)菌內(nèi)同源重組制備攜GFP的人白細(xì)胞介素-10cDNA腺病毒載體。目的：細(xì)菌內(nèi)同源重組

3、法構(gòu)建攜綠色熒光蛋白(Greenfluorescentprotein,GFP)的hIL-10cDNA重組腺病毒載體。結(jié)論：成功構(gòu)建GFP和hIL-10雙表達(dá)腺病毒載體，并于VSMC成功表達(dá)，為血管再狹窄的基因治療奠定了基礎(chǔ)。 第三部分人白細(xì)胞介素-10基因轉(zhuǎn)染聯(lián)合γ-干擾素抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖及其機(jī)制。目的：觀察人白細(xì)胞介素(humaninterleukin,hIL)-10基因轉(zhuǎn)染聯(lián)合應(yīng)用γ干擾素(interferon-γ，