測定某些中草藥活性組分的高效毛細管電泳新方法.pdf

1、毛細管電泳(Capillary electrophoresis，CE)是80年代初建立并迅速發(fā)展起來的一種新型分離技術(shù)，具有分離效率高、分析速度快、樣品和試劑消耗少、操作簡便等特點，已廣泛用于化學(xué)、生命科學(xué)、藥物和環(huán)境等領(lǐng)域，是當前分析化學(xué)中發(fā)展迅速的一個學(xué)科。本學(xué)位論文圍繞毛細管電泳在分離測定中草藥活性組分中的應(yīng)用進行了深入研究，建立了三種模型測定中草藥活性組分的新方法。 本論文第二部分充分利用了毛細管電泳中反向電壓的特點，研

2、究了反向電壓在不同毛細管電泳模式中的應(yīng)用，取得了以下幾方面的創(chuàng)新研究： 1.建立了分離測定綠原酸和咖啡酸的非水毛細管電泳新方法，并對山楂果實中的相應(yīng)成分進行了分析。 2.利用反向電壓及分析物的性質(zhì)，建立了大體積進樣.非水毛細管電泳測定綠原酸和咖啡酸的新方法，極大的改善了靈敏度。 3.利用反向電壓建立反向遷移毛細管膠束電動色譜(RF-MEKC)法同時分離測定了槲皮素、蘆丁、綠原酸，并將此方法應(yīng)用于測定魚腥草和山楂果

3、實中的相應(yīng)成分。 本論文分兩大部分共四章內(nèi)容。第一部分是有關(guān)毛細管電泳理論及應(yīng)用的進展，第二部分是研究報告： 第一部分：文獻綜述第一章：簡單介紹了CE的原理和特點、CE在藥物研究中的應(yīng)用以及反向電壓在毛細管電泳中的一些應(yīng)用。 第二部分：反向電壓在毛細管電泳不同模式中的應(yīng)用以及應(yīng)用于草藥中活性成分的分離測定第二章：建立了分離測定山楂果實中活性有機酸的非水毛細管電泳新方法。該方法簡單快速，分離條件為：35mM Tri

4、s-0.7％醋酸的甲醇溶液、分離電壓-25kV。在此最佳條件下，兩種分析物可在10min內(nèi)實現(xiàn)基線分離。綠原酸和咖啡酸的線性范圍均為20-200μg/ml，連續(xù)運行5次的遷移時間和峰面積的相對標準偏差分別為：2.82％和2.29％(日內(nèi))；4.02％和3.14％(日間)。樣品中加入25、50、100μg/mL綠原酸標準溶液的回收率分別為98.7％、98.2％和97.5％；加入25、50、100μg/mL咖啡酸標準溶液的回收率分別為95.

5、6％、102.5％和99.4％。 第三部分：利用大體積樣品堆積法(LVSS)提高了非水毛細管電泳分析山楂果實中的活性有機酸的靈敏度。分離緩沖液為35mM Tris-0.35％醋酸的甲醇溶液，分離電壓為-25kV，重力進樣50s。對Tris濃度、醋酸濃度、分離電壓和進樣時間等因素對分離及富集的影響做了系統(tǒng)研究。綠原酸和咖啡酸的線性范圍均為0.625-20μg/mL，檢測限(S/N=3)分別為0.08μg/ml和0.05μg/mL。

6、該方法已用于生山楂中綠原酸和咖啡酸的含量測定，樣品中加標回收率良好。 第四部分：應(yīng)用反向電壓建立反向遷移毛細管膠束電動色譜(RF-MEKC)法同時分離測定了魚腥草和山楂果實中的槲皮素、蘆丁和綠原酸。分離條件為：70mM SDS-30mM NaH2PO4、pH2.1，分離電壓-15kV，檢測波長214nm。在此最佳條件下，分析物可在15min內(nèi)實現(xiàn)基線分離。槲皮素、蘆丁和綠原酸的線性范圍及線性相關(guān)系數(shù)分別為25-400μg/mL(