組蛋白乙?；竝300抑制劑對(duì)t(8;21)AML細(xì)胞的生物學(xué)行為的作用及機(jī)制研究.pdf

1、背景：急性髓系白血病(Acute Myeloid Leukemia，AML)是常見(jiàn)的血液系統(tǒng)惡性腫瘤，臨床上約15％的AML病人伴有t(8；21)(q22；q22)染色體異常，而其編碼的異常蛋白AML1-ETO被證實(shí)在t(8；21)陽(yáng)性急性髓系白血病的發(fā)生發(fā)展中起到了重要的作用。最新研究證實(shí)組蛋白乙酰化酶p300在AML1-ETO對(duì)下游基因的激活過(guò)程中起到了重要的輔助作用，故p300很有可能成為有潛力的抗白血病治療新靶點(diǎn)。
　　

2、 目的：研究組蛋白乙?；竝300抑制劑C646對(duì)t(8；21)陽(yáng)性急性髓系白血病細(xì)胞生物學(xué)行為的作用及機(jī)制。
　　 方法：第一部分，應(yīng)用Cell Count Kit-8及克隆集落形成實(shí)驗(yàn)等方法，檢測(cè)組蛋白乙?；竝300抑制劑C646在體外對(duì)t(8；21)AML細(xì)胞系的增殖和克隆形成能力的作用；應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)，檢測(cè)C646對(duì)AML細(xì)胞系凋亡和周期的作用。第二部分，應(yīng)用熒光定量PCR以及Western Blot技術(shù)，在mRNA

3、以及蛋白水平檢測(cè)C646處理后t(8；21)AML細(xì)胞系內(nèi)BCL-2及組蛋白H3乙?；降淖兓?。第三部分，建立△AE轉(zhuǎn)基因白血病小鼠模型，采集小鼠脾臟白血病細(xì)胞，采用C646處理，觀察細(xì)胞體外克隆形成能力，并經(jīng)尾靜脈回輸至C57/BL6J小鼠體內(nèi)，觀察小鼠生存期。
　　 結(jié)果：第一部分，在t(8；21)陽(yáng)性的Kasumi-1以及SKNO-1細(xì)胞系中，C646處理24h后細(xì)胞增殖及克隆集落形成能力即受到明顯的抑制，且這種抑制作用

4、可持續(xù)72h或以上(P<0.01)，并隨C646濃度的增高而顯著提高(P<0.01)，但延長(zhǎng)C646處理時(shí)間并不能提高相應(yīng)的作用(P>0.05)；C646處理可對(duì)Kasumi-1、SKNO-1和穩(wěn)定表達(dá)AML1-ETO的U937-AE白血病細(xì)胞系的凋亡產(chǎn)生誘導(dǎo)作用，但對(duì)AML1-ETO陰性的U937細(xì)胞系無(wú)顯著誘導(dǎo)凋亡作用；C646在較低濃度下即可對(duì)AMLl-ETO陽(yáng)性的AML細(xì)胞系產(chǎn)生明顯的細(xì)胞周期阻滯的作用。
　　 第二部分

5、，采用10μM的C646處理Kasumi-1、SKNO-1細(xì)胞系24h，即可在mRNA水平顯著的抑制BCL-2基因的表達(dá)(P<0.05)，但提高C646濃度以及延長(zhǎng)處理時(shí)間沒(méi)有明顯提高其對(duì)BCL-2 mRNA表達(dá)的抑制作用；Western Blot檢測(cè)提示在該濃度下C646還可明顯抑制BCL-2的蛋白表達(dá)，同時(shí)降低組蛋白H3的乙?；健５谌糠?，采用C646和DMSO分別在體外處理△AE轉(zhuǎn)基因小鼠脾臟白血病細(xì)胞，經(jīng)C646處理的白血病

6、細(xì)胞的克隆形成能力與DMSO處理的對(duì)照組細(xì)胞相比明顯減弱，將兩組細(xì)胞分別經(jīng)尾靜脈回輸至小鼠體內(nèi)，接受C646處理后白血病細(xì)胞的小鼠生存期較DMSO對(duì)照組明顯延長(zhǎng)(P<0.01)。
　　 結(jié)論：1.組蛋白乙?；竝300抑制劑C646可以在體外抑制AML1-ETO陽(yáng)性的AML細(xì)胞系的增殖和克隆形成能力；2.C646對(duì)t(8；21)AML細(xì)胞生物學(xué)功能的影響強(qiáng)度在一定范圍內(nèi)與劑量呈強(qiáng)依賴性，但延長(zhǎng)處理時(shí)間并不能增強(qiáng)該效應(yīng)；3.C64

7、6對(duì)AML1-ETO陽(yáng)性白血病細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡和增加細(xì)胞周期阻滯的作用是導(dǎo)致細(xì)胞增殖和克隆形成能力受到抑制的原因之一；4.C646可通過(guò)降低組蛋白乙酰化水平，抑制AML1-ETO下游基因Bc1-2的激活作用，導(dǎo)致BCL-2基因的mRNA以及蛋白表達(dá)水平下降，從而發(fā)揮對(duì)AML1-ETO陽(yáng)性細(xì)胞系細(xì)胞生物學(xué)功能的影響；5.C646體外處理可以抑制△AE轉(zhuǎn)基因白血病小鼠模型原代白血病細(xì)胞的體外克隆形成能力；并延長(zhǎng)小鼠生存期。上述研究結(jié)果提示組蛋