重組人紅細(xì)胞生成素對(duì)大鼠局灶性腦缺血損傷的保護(hù)作用及機(jī)制的研究.pdf

1、研究背景： 缺血性腦血管疾病不僅是威脅人類健康的主要疾病之一，且近年來患病人數(shù)有逐年增加的趨勢(shì)。因此探討缺血性腦血管疾病的病理生理學(xué)機(jī)制，尋求有效的治療手段成為了目前的研究熱點(diǎn)。隨著對(duì)缺血性腦血管疾病病理生理認(rèn)識(shí)的深入，人們?cè)絹碓疥P(guān)注細(xì)胞因子在腦缺血損傷中的作用。特別是血小板源生長(zhǎng)因子BB(PDGF-BB)和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)。 重組人紅細(xì)胞生成素(recombinanthumanerythropoieti

2、n，rhEPO)是一種含唾液酸的酸性糖蛋白，可以促進(jìn)造血祖細(xì)胞的增殖與分化。已被廣泛應(yīng)用于防止和糾正腎性貧血和非腎性貧血。但是，越來越多的研究顯示rhEPO對(duì)腦神經(jīng)損傷具有保護(hù)作用。rhEPO對(duì)缺血腦組織的保護(hù)機(jī)制主要是通過抑制神經(jīng)毒性物質(zhì)谷氨酸釋放，增加細(xì)胞鈣內(nèi)流，抑制NO的過度合成，免疫調(diào)節(jié)及阻止神經(jīng)元凋亡等。 細(xì)胞因子在腦缺血損傷中起著非常重要的作用。但rhEPO對(duì)腦缺血過程中與保護(hù)作用相關(guān)的細(xì)胞因子PDGF-BB和TGF

3、-β1的影響的文獻(xiàn)未見報(bào)導(dǎo)。此實(shí)驗(yàn)觀察了rhEPO對(duì)腦缺血損傷的保護(hù)作用及初步探索其對(duì)腦缺血中與保護(hù)作用相關(guān)的細(xì)胞因子的影響。 目的： 利用免疫組織化學(xué)方法，探討大鼠缺血側(cè)腦組織PDGF-BB及TGF-β1的表達(dá)變化規(guī)律。應(yīng)用rhEPO治療后，觀察rhEPO對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠的神經(jīng)功能評(píng)分、腦組織梗死面積、病理學(xué)變化及對(duì)缺血側(cè)腦組織PDGF-BB及TGF-β1的表達(dá)的影響。 方法： 大鼠局灶性腦缺血

4、再灌注(MCAO/R)模型參考Longa法制備。(1)選用健康雄性SD大鼠36只，隨機(jī)分為6組：正常對(duì)照組、假手術(shù)組、腦缺血再灌注12h組、腦缺血再灌注24h組、腦缺血再灌注48h組、腦缺血再灌注72h組，每組6只。大鼠在相應(yīng)的時(shí)間處死后，取腦組織行冰凍切片。分別用H.E染色方法觀察腦組織病理變化，免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)PDGF-BB和TGF-β1的表達(dá)。(2)選用健康雄性SD大鼠18只，制作腦缺血再灌注模型后，隨機(jī)分為3組：腦缺血再

5、灌注組、rhEPO治療組和生理鹽水治療組，每組各6只。腦缺血再灌注組不予處理；rhEPO治療組按5000IU/kg于腦缺血2h再灌注同時(shí)腹腔注射rhEPO；生理鹽水治療組于腦缺血2h再灌注同時(shí)腹腔注射等體積生理鹽水。此3組大鼠腦缺血2h再灌注24h時(shí)進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分并處死，腦組織切片進(jìn)行TTC染色觀察梗死面積。(3)再選用健康雄性SD大鼠18只，同樣制作腦缺血再灌注模型后，隨機(jī)分為3組：腦缺血再灌注組、rhEPO治療組和生理鹽水治療組，

6、每組各6只。腦缺血再灌注組不予處理；rhEPO治療組按5000IU/kg于腦缺血2h再灌注同時(shí)腹腔注射rhEPO；生理鹽水治療組于腦缺血2h再灌注同時(shí)腹腔注射等體積生理鹽水。此3組大鼠腦缺血2h再灌注24h時(shí)處死，取腦組織行冰凍切片，分別用H.E染色方法觀察腦組織病理變化、免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)PDGF-BB和TGF-β1的表達(dá)。 結(jié)果： 免疫組織化學(xué)染色提示，隨腦缺血再灌注時(shí)間延長(zhǎng)，缺血側(cè)腦組織PDGF-BB和TGF

7、-β1的陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)量增加，尤其以缺血半暗帶更明顯。rhEPO治療組相比腦缺血再灌注組和生理鹽水治療組：神經(jīng)功能評(píng)分增加；腦組織梗死面積縮小、神經(jīng)細(xì)胞的水腫及壞死程度減輕；缺血側(cè)腦組織PDGF-BB和TGF-β1的表達(dá)提高。腦缺血再灌注組和生理鹽水治療組相比上述指標(biāo)無差異。 結(jié)論： 腦缺血再灌注后，缺血側(cè)腦組織PDGF-BB和TGF-β1的表達(dá)增強(qiáng)；利用rhEPO在再灌注早期行藥物干預(yù)可以使局灶性腦缺血再灌注模型大鼠神