伴放線放線桿菌LPS對不同部位巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)及凋亡相關(guān)基因表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的：研究伴放線放線桿菌內(nèi)毒素(Aa-LPS)作用不同血脂狀態(tài)下不同組織器官來源(血液、肺、腹腔、肝臟)的兔單核/巨噬細(xì)胞后細(xì)胞內(nèi)炎癥因子NF-κB信號表達(dá)及細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的變化,并探討加入IL-10后對Aa-LPS誘導(dǎo)的炎癥及凋亡變化的影響,為研究牙周組織疾病與全身其它組織器官疾病間的關(guān)聯(lián)提供依據(jù)。
　　方法：將采用密度梯度離心法獲取的新西蘭兔不同部位巨噬細(xì)胞按1×106cell/well/ml的密度隨機(jī)分為control組、

2、Aa-LPS組、Ecoli-LPS組、IL-10組、Aa-LPS+IL-10組。按實(shí)驗(yàn)分組加入Aa-LPS(1μg/ml)、Ecoli-LPS(1μg/ml)、IL-10(0.1μg/ml),24h后裂解細(xì)胞。1.通過Westernblot檢測NF-κB、IκB的表達(dá),比較不同部位巨噬細(xì)胞受刺激后炎癥反應(yīng)的變化。2.采用RT-PCR法來檢測凋亡相關(guān)基因caspase-3、Bax、Fas、p53的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1.(1)1μ

3、g/mlAa-LPS作用于不同部位的巨噬細(xì)胞后,所引起的炎癥效應(yīng)不同,Aa-LPS可上調(diào)正常兔肺泡巨噬細(xì)胞(AM)、高脂血癥兔肺泡巨噬細(xì)胞(AM)、外周血單核細(xì)胞(Mo)和肝枯否細(xì)胞(Kc)的炎癥蛋白NF-κB的表達(dá),下調(diào)高脂血癥兔腹腔巨噬細(xì)胞(PM)炎癥蛋白NF-κB的表達(dá)。(2)不同部位巨噬細(xì)胞對1μg/mlEcoli-LPS刺激導(dǎo)致的炎癥反應(yīng)趨勢與Aa-LPS組相似。(3)Aa-LPS+IL-10組NF-κB的表達(dá)較Aa-LPS組

4、下降,加入IL-10后能抑制Aa-LPS所引起的炎癥反應(yīng)。2.(1)1μg/mlAa-LPS作用于不同部位的巨噬細(xì)胞后,所引起的凋亡效應(yīng)不同。Aa-LPS促進(jìn)正常兔AM、Mo、Kc和高脂血癥四個部位巨噬細(xì)胞的凋亡,抑制正常兔PM的凋亡。(2)不同部位巨噬細(xì)胞對1μg/mlEcoli–LPS刺激導(dǎo)致的凋亡反應(yīng)趨勢與Aa-LPS組相似。(3)體外加入IL-10后對Aa-LPS引起的細(xì)胞凋亡無明顯的抑制作用。
　　結(jié)論：1.本實(shí)驗(yàn)體外培