不同基因型幽門螺桿菌對(duì)胃癌BGC-823細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,H.pylori)是一種可長(zhǎng)期定植于人類胃粘膜的革蘭陰性微需氧菌,在全世界范圍內(nèi)感染率超過(guò)50％。H.pylori是引起萎縮性胃炎和胃潰瘍等慢性炎癥的致病因子。
　　 流行病學(xué)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí),H.pylori慢性感染是導(dǎo)致胃癌的重要危險(xiǎn)因素,世界衛(wèi)生組織已將其列為一類致癌源。然而H.pylori確切的致癌機(jī)制至今仍不清楚。細(xì)胞毒素相關(guān)基因A蛋白(cytotoxinasso-ci

2、ated gene A,CagA)是H.pylori重要的毒力因子之一。
　　 根據(jù)cagA3端可變區(qū)EPIYA重復(fù)序列的數(shù)目的變化可以分為東方型和西方型菌株,研究顯示東亞型的毒性明顯高于西方型。
　　 本實(shí)驗(yàn)的目的是研究東亞型和西方型H.pylori刺激人胃癌細(xì)胞BGC-823后,對(duì)細(xì)胞形態(tài)以及凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響。以此闡明東西方菌株之間的毒力差異和致病力的差異,以及影響菌株毒力差異的可能的機(jī)制。
　　 方法

3、:
　　 1.分別用東亞型 H.pylori菌株、和西方型H.pylori菌株超聲提取液,刺激胃癌細(xì)胞BGC-823,顯微鏡下直接觀察細(xì)胞形態(tài)的變化。
　　 2.MTT法分析H.pylori超聲提取液刺激后胃癌BGC-823細(xì)胞增殖抑制情況。
　　 3.利用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(QRT-PCR)檢測(cè)胃癌細(xì)胞BGC-823凋亡抑制基因survivin和促凋亡基因caspase-3的mRNA表達(dá)水平。
　　

4、4.基因芯片檢測(cè)不同基因型H.pylori超聲提取液刺激胃癌BGC-823細(xì)胞12h凋亡相關(guān)基因表達(dá)變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.H.pylori超聲提取液刺激胃癌細(xì)胞BGC-823后12小時(shí),出現(xiàn)蜂鳥表型,呈時(shí)間依賴性,24小時(shí)最明顯；東亞型組與西方型組相比,引起的細(xì)胞蜂鳥表型百分率明顯增加(P<0.05)。
　　 2.MTT法檢測(cè)顯示,H.pylori超聲提取液刺激BGC-823細(xì)胞后,引起細(xì)胞增殖的增加,

5、東亞型菌株與西方型菌株相比,具有更強(qiáng)的促進(jìn)胃癌細(xì)胞BGC-823的增殖作用。
　　 3.H.pylori超聲提取液刺激胃癌細(xì)胞BGC-823后,引起凋亡抑制基因survivin mRNA的表達(dá)量上調(diào),凋亡基因caspase-3基因mRNA的表達(dá)的下降。東亞型刺激組survivin mRNA的表達(dá)的上調(diào)、以及caspase-3基因mRNA的表達(dá)的下降均較西方型組更明顯(P<0.05)。
　　 4.基因芯片檢測(cè)顯示H.pyl

6、ori超聲提取液刺激胃癌BGC-823細(xì)胞12小時(shí)后,84個(gè)凋亡相關(guān)基因的mRNA的表達(dá)譜出現(xiàn)變化,東亞型和西方型H.pylori共上調(diào)了14條,而其共同上調(diào)的基因只有BCL2L2,在下調(diào)的13條基因中,有3條基因受其共同調(diào)節(jié):CASP14、CD27、CD70。
　　 結(jié)論:
　　 1.東亞型和西方型H.pylori超聲提取液可誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞BGC-823發(fā)生形態(tài)學(xué)改變,并通過(guò)引起凋亡相關(guān)基因改變而抑制細(xì)胞凋亡,促進(jìn)腫瘤的