薯莨鞣質(zhì)防治急性放射性腸損傷的研究.pdf

1、目的:薯莨鞣質(zhì)是從中藥薯莨(Dioscorea CirrhosaLour)中提取的一種多元酚類化合物,因其具有收斂及蛋白質(zhì)凝固作用,臨床上用于各種止血、止瀉及抗菌抗病毒。本實(shí)驗(yàn)通過觀察薯莨鞣質(zhì)對急性放射性小鼠腸組織形態(tài)學(xué)和炎性因子的影響及對自由基的清除能力來探討其對急性放射性腸炎的防治作用及作用機(jī)制。
　　方法:1、取薯莨粉末100g,加90％乙醇500mL,常溫浸提24h,回流提取3次,每次1h,離心取上清,減壓濃縮,真空干燥。

2、用300ml90%甲醇重懸,超聲提取30min,離心取上清,進(jìn)行鞣質(zhì)含量的測定、薄層掃描、吸收曲線測定及測量其對自由基的清除率。
　　2、將40只健康雄性昆明種小鼠隨機(jī)分為空白對照組、單純照射組、茶多酚組(陽性對照組)、五倍子鞣質(zhì)組和薯莨鞣質(zhì)組,每組8只,7d后除對照組外其余各組給予單次8.0Gy60Coγ射線照射(劑量率2.0Gy/min),對照組佯照射。照前2h及照后18h分別給予灌胃給藥一次,給藥量為165mg/kg體重?？?/p>

3、白對照組和單純照射組用0.5%羧甲基纖維素鈉0.5ml灌胃。照后連續(xù)觀察30天,記錄受照小鼠的活動、飲食和飲水等行為,毛發(fā)、皮膚和眼睛等的變化及每日小鼠死亡數(shù),每3天記錄各組活存動物體重。計(jì)算出小鼠存活率、平均存活時間、提高率和保護(hù)系數(shù)。
　　3、選用健康雄性昆明種小鼠40只,隨機(jī)分為單純照射組、薯莨低劑量組100mg/(kg·d)、中等劑量組200mg/(kg·d)、高劑量組400mg/(kg·d)、空白對照組,每組8只。薯莨鞣

4、質(zhì)用0.5%羧甲基纖維素鈉制備成懸浮劑,照射給藥組連續(xù)灌胃給藥一周,單純組及空白對照組灌胃等量羧甲基纖維素鈉,麻醉后用60Coγ射線以16.0Gy/min照射劑量自劍突下至肛門一次性照射。照后3天,處死小鼠取屈氏韌帶5cm下空腸2cm左右制作石蠟切片,光鏡下觀察組織病理學(xué)變化,免疫組化法檢測TGFβ1和ICAM-1在小腸粘膜中的表達(dá)水平。另取回盲部近端回腸2cm左右用生化方法測定小腸中SOD、MDA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:1、薯莨

5、中制備鞣質(zhì)得率為21.09%,其甲醇溶液在221nm處有一強(qiáng)紫外吸收峰,能清除DPPH自由基,半抑制濃度為0.171mg/ml。薯莨鞣質(zhì)具有較好的DPPH自由基的清除能力,在給定條件下,0.4mg/ml以下薯莨甲醇溶液與其自由基清除能力呈正相關(guān),(r=0.992),EC50=0.171mg/ml。
　　2、全身照射后,給藥組小鼠的精神狀態(tài)明顯優(yōu)于單純照射組,薯莨鞣質(zhì)組、五倍子鞣質(zhì)組和茶多酚組小鼠的平均存活時間與單純照射組比較存活時

6、間均明顯延長(P<0.01或P<0.05),與單純照射組相比,茶多酚組、薯莨鞣質(zhì)組、五倍子鞣質(zhì)組小鼠生存提高率明顯增加,保護(hù)系數(shù)均大于1.2。其中薯莨鞣質(zhì)相對于茶多酚和五倍子鞣質(zhì)在輻照小鼠30天存活時間中表現(xiàn)出了較好的抗輻射作用。
　　3、腹部照射后單純照射組小鼠腸腔明顯擴(kuò)張、充血,光鏡下觀察單純照射組小腸絨毛水腫,部分絨毛上皮細(xì)胞斷裂、脫落,給藥組小鼠小腸絨毛較完整,絨毛結(jié)構(gòu)存在,腺體基本正常。與空白組比較,單純照射組小腸組織T

7、GFβ1與ICAM-1的表達(dá)較空白對照組增強(qiáng),SOD活力明顯降低,MDA含量明顯增高(P<0.05)。與單純照射組相比,薯莨中等劑量組和薯莨高劑量組對小腸組織TGFβ1與ICAM-1的表達(dá)明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,P<0.01),各組均可提高腸組織中SOD活力并降低MDA含量,(P<0.05,P<0.01),以中劑量組為最佳。
　　結(jié)論:1、從傳統(tǒng)中藥薯莨中分離制備得到純度較好的薯莨鞣質(zhì),其對DPPH自由基具有很好