內(nèi)生細(xì)菌Em7對(duì)油菜菌核病的防治作用及機(jī)理初探.pdf

1、由核盤(pán)菌(Sclerotiniasclerotiorum)所致的油菜菌核病是一種世界性病害，在世界各油菜產(chǎn)地均造成嚴(yán)重危害，在我國(guó)居油菜三大病害之首。目前由于尚未發(fā)現(xiàn)免疫和高抗品種，所以對(duì)油菜菌核病的防治仍以化學(xué)防治為主。但大量化學(xué)藥劑的使用將對(duì)人畜產(chǎn)生一定的毒害且造成嚴(yán)重的環(huán)境污染，并會(huì)導(dǎo)致病原菌產(chǎn)生抗藥性。國(guó)內(nèi)外已經(jīng)對(duì)油菜菌核病的生物防治進(jìn)行了大量研究，但有關(guān)利用植物內(nèi)生細(xì)菌進(jìn)行病害防治的研究報(bào)道極少。因此本試驗(yàn)從小麥不同生育期、不

2、同部位分離獲得的內(nèi)生細(xì)菌中，篩選到1株對(duì)油菜菌核病具有較好防治效果的菌株Em7，并對(duì)其作用機(jī)理進(jìn)行了初步研究。主要結(jié)果如下： 1.以油菜菌核病菌為靶標(biāo)菌，在PDA培養(yǎng)基上采用平板對(duì)峙生長(zhǎng)法，從63株小麥內(nèi)生細(xì)菌中篩選得到1株高效菌株Em7。該菌株對(duì)油菜菌核病菌的抑菌帶可達(dá)到15mm，對(duì)菌絲生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，并且能夠完全抑制菌核的形成和萌發(fā)。對(duì)Em7發(fā)酵液經(jīng)10000rpm離心后得到的上清液進(jìn)行試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)隨著稀釋倍數(shù)的增加，其

3、對(duì)菌絲生長(zhǎng)和菌核萌發(fā)的抑制作用逐漸降低。 2.Em7發(fā)酵上清液對(duì)溫室苗期油菜菌核病的防治效果可達(dá)95.73％。在葉片上接種病菌菌餅前后不同時(shí)間噴施發(fā)酵上清液對(duì)病害均有防治作用，但防效之間差異顯著。接種前24h噴施防效為93.28％，效果最好；接種同時(shí)噴效果次之；接種后24h噴施防效為69.40％，效果最差。此外，隨著發(fā)酵上清液的稀釋?zhuān)浞啦⌒Ч饾u降低。 3.液培法測(cè)定結(jié)果表明Em7發(fā)酵上清液具有較廣的抑菌譜。其對(duì)28株

4、植物病原真菌中的22株菌絲生長(zhǎng)的抑制效果達(dá)50％以上，并對(duì)4種病原菌孢子的萌發(fā)具有極強(qiáng)的抑制作用；溫室盆栽結(jié)果表明，Em7對(duì)小麥條銹病、白粉病的防效也分別達(dá)到了71.36％、81.20％。 4.通過(guò)光學(xué)和掃描電子顯微鏡觀(guān)察，Em7對(duì)不同病原真菌菌絲生長(zhǎng)發(fā)育的影響不同，主要分為以下幾類(lèi)：(1)細(xì)胞質(zhì)外滲；(2)菌絲畸形；(3)菌絲叢生；(4)頂端膨大等。Em7發(fā)酵上清液經(jīng)硫酸銨沉淀，透析去鹽后的溶液對(duì)菌絲生長(zhǎng)具有明顯抑制作用，初步

5、認(rèn)為其抑菌活性可能是抗菌蛋白或多肽的作用。此外，Em7菌懸液對(duì)蘿卜、白菜種子萌發(fā)及生長(zhǎng)具有一定的促進(jìn)作用。 5.Em7無(wú)菌上清液對(duì)高溫具有一定的忍耐程度，100℃處理30min后，其抑菌作用與未處理的之間無(wú)顯著差異，且在堿性條件下較穩(wěn)定。經(jīng)過(guò)篩選，Em7在以下條件培養(yǎng)，獲得的無(wú)菌上清液抑菌活性最強(qiáng)。培養(yǎng)基成分：蛋白胨1％、牛肉浸膏0.5％、酵母粉0.5％、葡萄糖0.5％、NaCl0.5％；培養(yǎng)基起始pH7～8；培養(yǎng)溫度28℃。