深綠木霉Trichoderma atroviride生物菌肥的研制及對(duì)油菜菌核病、根腫病的生物防治.pdf

1、本文利用上海交通大學(xué)的深綠木霉(Trichoderma atroviride)，REMI突變菌株H6作為供試菌株，進(jìn)行了其固體發(fā)酵生產(chǎn)生物菌肥的基質(zhì)配方及發(fā)酵條件的研究，進(jìn)一步研究其對(duì)秸稈堆肥的腐熟工藝和對(duì)蔬菜的促生作用。同時(shí)還研究了該供試菌株對(duì)油菜菌核病（Sclerotinia sclerotiorum）、根腫病(Plasmodiophora brassicae)的生物防治的抑制機(jī)理和田間防效等。主要結(jié)果如下：
　　 1.深綠

2、木霉(Trichoderma atroviride)REMI突變菌株H6菌肥基質(zhì)成分及配置比例為：玉米渣：稻殼：稻草粉：麥麩=3：10：10：15，最佳含水量為50％，最佳接種量為20％，最適發(fā)酵溫度為28℃，最適的發(fā)酵周期為7d。
　　 2.通過(guò)制作秸稈堆肥，從秸稈肥的團(tuán)粒重、團(tuán)粒直徑、發(fā)酵色澤來(lái)看，4000mL水和秸稈與腐熟劑用量比為1：1的處理發(fā)酵效果較好。通過(guò)不同菌株的腐熟劑制備秸稈菌肥的配方篩選，深綠木霉(T. atr

3、oviride)REMI突變菌株H6菌肥作腐熟劑生產(chǎn)的秸稈堆肥腐熟效果最佳，能夠有效降解水稻秸稈，其纖維素酶活性明顯高于其他處理，CMC酶活性為3.48U.g-1，其他處理與對(duì)照差異不顯著。各處理FPA酶活與對(duì)照相比差異均未達(dá)顯著水平，HTK3處理FPA酶活力最高(1.13U.g-1)。H6處理的秸稈菌肥還原糖含量最高，為17.14mg.g-1，與對(duì)照相比差異達(dá)極顯著水平，比對(duì)照高29.6％；各處理秸稈菌肥N、P的含量均高于對(duì)照，而鉀的

4、含量與對(duì)照相近。H6處理和HTK3處理的氮含量最高，為1.88％;H6處理的磷含量明顯高于其他各處理，為5.9g.kg-1;各處理的鉀含量差異不顯著。在對(duì)蔬菜生長(zhǎng)的促生作用方面，H6處理對(duì)番茄、黃瓜的株高、鮮重、干重的影響均高于對(duì)照。
　　 3.深綠木霉(T atroviride)REMI突變菌株H6對(duì)油菜菌核病具有一定的生物防治潛力。在對(duì)峙培養(yǎng)中，深綠木霉H6對(duì)核盤(pán)菌不形成透明抑菌圈，培養(yǎng)96h后在兩菌交界處可形成6mm左右的

5、明顯的黃褐色抑菌帶。在這一抑菌帶中核盤(pán)菌菌落畸形，生長(zhǎng)受到明顯抑制，其菌落的生長(zhǎng)半徑明顯低于對(duì)照半徑，木霉菌H6對(duì)核盤(pán)菌菌絲生長(zhǎng)的抑制率為77.27％。木霉H6與核盤(pán)菌的菌落接觸后可繼續(xù)生長(zhǎng)，能逐漸完全覆蓋核盤(pán)菌菌落，形成了很寬的拮抗帶，并產(chǎn)生了大量的分生孢子。木霉菌H6對(duì)核盤(pán)菌菌核的形成有抑制作用，可減少核盤(pán)菌菌落上菌核的重量和數(shù)量，重量減少率和數(shù)量減少率分別為79.45％和70.00％。顯微鏡下觀察到深綠木霉菌株H6以纏繞或平行生長(zhǎng)

6、等方式寄生于核盤(pán)菌菌絲上，核盤(pán)菌菌絲生長(zhǎng)受到限制，菌絲變形或扭曲，細(xì)胞質(zhì)消解。
　　 木霉發(fā)酵代謝物對(duì)核盤(pán)菌菌絲生長(zhǎng)具有明顯抑制作用，過(guò)濾除菌發(fā)酵液與2PDA培養(yǎng)基以體積比1：1混合的處理R1的抑菌率最高，達(dá)到67.81％，過(guò)濾除菌發(fā)酵液處理R的抑菌率大于高壓滅菌液處理R′的抑菌率。方法二中，深綠木霉菌H6的發(fā)酵代謝產(chǎn)物對(duì)核盤(pán)菌菌絲的生長(zhǎng)具有一定的抑制率，達(dá)到61.36％，與方法一的結(jié)果接近。易揮發(fā)性代謝產(chǎn)物對(duì)核盤(pán)菌的抑制率沒(méi)有

7、發(fā)酵代謝物明顯，抑制率僅為17.5％。木霉發(fā)酵濾液對(duì)核盤(pán)菌菌核萌發(fā)有抑制作用，培養(yǎng)48h、72h和96h后，用木霉發(fā)酵濾液浸泡處理的菌核萌發(fā)百分率分別為12％、70％和80％，菌核萌發(fā)較慢，萌發(fā)后產(chǎn)生的菌絲的生長(zhǎng)受到一定程度的抑制。發(fā)酵濾液對(duì)核盤(pán)菌子囊孢子的萌發(fā)有抑制作用，發(fā)酵濾液原液對(duì)核盤(pán)菌子囊孢子萌發(fā)的抑制率達(dá)到59.34％。離體防效實(shí)驗(yàn)上，木霉菌H6孢子懸浮液對(duì)核盤(pán)菌在葉片上的侵染和擴(kuò)展有較強(qiáng)的抑制作用，抑制率達(dá)到76.29％，并

8、產(chǎn)生大量孢子，形成的病斑也比對(duì)照小。發(fā)酵濾液及其稀釋液在離體葉片和莖桿實(shí)驗(yàn)中均有明顯的抑制作用，最高抑制率分別達(dá)到73.64％和77.24％。大田防效實(shí)驗(yàn)中，木霉發(fā)酵代謝物的相對(duì)防效為76.28％，達(dá)到了多菌靈防效的80.41％；木霉菌肥的相對(duì)防效為63.24％，達(dá)到了多菌靈防效的66.67％，說(shuō)明木霉菌肥有很大的應(yīng)用開(kāi)發(fā)前景。
　　 4.深綠木霉(T. atroviride)REMI突變菌株H6對(duì)根腫病具有一定的生物防治潛力。