C-EBPα基因表達對PARs激活HSC促肝纖維化形成的負性調控作用.pdf

1、肝纖維化是嚴重威脅人類健康的疾病之一，迄今沒有理想的治療方法。目前國內外大多數(shù)學者認為，肝星狀細胞(hepatic stellate cell，HSC)激活是肝纖維化的關鍵，抑制HSC的激活對肝纖維化防治有重要作用。
　　 蛋白酶活化受體(protease activated receptors，PARs)屬于G-蛋白偶聯(lián)受體家族成員，可參與調控細胞增殖和分化，與多種病理生理過程相關。我們前期有關PAR1.2調控HSC活化、增殖

2、作用研究提示：PAR1.2是凝血酶和胰蛋白酶介導的肝纖維化自動放大循環(huán)過程中的主要炎癥和纖維化受體，其表達不僅可以促進肝纖維化形成，還可以加重肝臟炎癥級聯(lián)反應，在肝纖維化形成中起著正性促進作用。拮抗PAR1.2活性可以抑制HSC激活，阻斷膠原蛋白產(chǎn)生，還可以限制肝臟炎癥反應，中斷肝纖維化過程中HSC激活后的自動放大循環(huán)作用，但是至今在肝纖維化的防治研究中尚未發(fā)現(xiàn)有效的選擇性PAR1.2的抑制劑和方法。
　　 肝纖維化研究發(fā)現(xiàn)HS

3、C激活的顯著變化是細胞內脂滴的減少甚至消失，脂滴的消失意味著去脂肪細胞分化，HSC向脂肪細胞分化是維持其靜止所必須，去脂肪細胞分化在HSC激活中起著關鍵作用。CCAAT增強子結合蛋白a(CCAAT enhancer bindingproteins a，C/EBPa)基因表達是維持脂肪細胞分化的重要轉錄因子之一，其主要功能是促進脂肪細胞進入終末分化，C/EBPα單獨表達增強足以誘導前脂肪細胞3T3向脂肪細胞分化。目前已知肝組織中的肝細胞及

4、靜止的HSC中有C/EBPα的表達，活化的HSC中C/EBPα表達陰性，那么，與脂肪細胞分化脂滴形成相關的C/EBPα能否維持HSC靜止，引入C/EBPα維持脂肪細胞分化防止HSC激活機制對PARs促肝纖維化形成是否有負性調節(jié)作用？
　　 鑒于以上認識，本研究擬在PAR1.2激活HSC促肝纖維化形成的正性調控基礎上，構建C/EBPα載體并轉染經(jīng)PAR1.2激活的HSC，觀察C/EBPα阻止HSC激活并抑制肝纖維化形成作用，以期把

5、對PAR1.2的拮抗和上調C/EBPα表達引入HSC激活的負性調控機制中，為肝纖維化防治提供依據(jù)。
　　 本課題的主要結果和結論：
　　 1.HSC-T6保持了HSCs原始細胞學特征，激活的HSC-T6可以表達α-SMA并合成Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白，能較好的反應其在體內的生物學過程，是研究肝纖維化的理想細胞模型。
　　 2.雙酶切鑒定pcDNA3.1(-)-C/EBPα質粒重組體，可完全切回至C/EBPα及pcDNA3

6、.1(-)載體分子量大小，表明此質粒構建成功，滿足后續(xù)試驗要求。
　　 3.外源性C/EBPα基因可有效轉染HSC-T6，轉染后可高表達。上調C/EBPα表達在一定程度上可抑制HSC-T6活化及膠原蛋白的合成。
　　 4.將外源性C/EBPα引入到PAR1.2激活的HSC-T6細胞中，α-SMA及Ⅰ型前膠原的表達均下降，細胞增殖度也降低，提示：上調C/EBPα表達在一定程度上可抑制PAR1、2對HSC活化、增殖及分泌膠原