咽部照射后中耳組織放射損傷及機體免疫狀態(tài)菌群相關性因素的研究.pdf

1、第一部分菌群相關的中耳組織病理學和機體免疫狀態(tài)研究
　　 目的:觀察機體微生物級別不同的SPF(specificpathogenfree,SPF)級大鼠和普通(CV)級大鼠對于咽鼓管粘膜病理以及機體免疫狀態(tài)的影響。
　　 方法:SPF級和CV級SD雄性大鼠各8只,作兩種大鼠的口咽菌群培養(yǎng)和鑒定;大鼠咽鼓管光鏡,掃描電鏡觀察;流式細胞儀分析(FCM)檢測大鼠外周血T淋巴細胞及CD4+、CD8+T淋巴細胞亞群表達區(qū)別;脾臟系

2、數(shù)的比較。
　　 結果:①CV級大鼠口咽部細菌培養(yǎng)陽性率為10096,并為銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌等致病菌,SPF級大鼠口咽部細菌培養(yǎng)陽性率為25％,且為常駐菌奇異變形桿菌;②咽鼓管光鏡檢查發(fā)現(xiàn):兩種大鼠細胞形態(tài)和組織結構均正常,且相似,但光鏡下SPF級大鼠咽鼓管粘膜杯狀細胞數(shù)目明顯減少(P＜0.05),掃描電鏡顯示兩種大鼠纖毛形態(tài)均正常;③FCM顯示SPF級大鼠外周血CD4+淋巴細胞比例較低(P＜0.05);④脾臟系數(shù)差別

3、無統(tǒng)計學意義,但SPF級大鼠脾臟系數(shù)相對較小。結論:SPF級大鼠和CV級大鼠在口咽部細菌陽性率和種類上存在差異;兩種大鼠在光鏡和電鏡下形態(tài)基本相同,但CV級大鼠杯狀細胞相對較多說明曾經中耳感染或慢性低毒性刺激的可能;FCM檢查和脾臟系數(shù)提示SPF級大鼠微生物刺激程度較低。
　　 第二部分中耳組織放射損傷及咽部菌群狀態(tài)與機體免疫功能相關性的研究
　　 目的:觀察SPF級大鼠和CV級大鼠在中耳鼻咽部不同劑量照射下早期中耳的組

4、織病理改變及機體免疫狀態(tài)變化,探討放射后全身免疫狀態(tài)的改變對中耳組織損傷的影響。
　　 方法:選取SPF級和CV級雄性SD大鼠各15只,每組5只。以6MX直線加速器以10Gy、20Gy、30Gy照射大鼠鼻咽區(qū)域,在放射后24-36小時進行取材,并與第一部分研究的未照射的大鼠相比較,觀察照射后大鼠的口咽菌群改變情況;大鼠咽鼓管掃描電鏡檢查;咽鼓管粘膜ICAM-1表達:放射前后大鼠外周血T淋巴細胞及CD4+、CD8+淋巴細胞亞群及T

5、淋巴細胞表面ICAM-1(CD54)表達變化:統(tǒng)計學分析咽鼓管粘膜ICAM-1表達與外周血T淋巴細胞及亞群的關系。
　　 結果:①放射后SPF級大鼠口咽細菌陽性率上升,但只能檢出奇異變形桿菌,CV級大鼠細菌培養(yǎng)仍呈現(xiàn)種類多樣、致病菌多的特點;②SPF級大鼠和CV級大鼠在放射前咽鼓管粘膜ICAM-1均未表達,照射后ICAM-1表達開始上升,SPF級大鼠ICAM-1表達明顯偏弱,統(tǒng)計學組間分析無明顯差異,CV級大鼠在放射劑量較大時(

6、30Gy)ICAM-1明顯表達,統(tǒng)計學組間分析差異明顯;③電離輻射在較早時期就能導致咽鼓管超微結構的變化,輻射劑量是形態(tài)病理變化的重要因素,輻射劑量相同時,CV級大鼠咽鼓管超微結構損傷程度均比SPF級大鼠嚴重;④CV級大鼠在輻射后外周血T淋巴細胞總數(shù)和CD4+淋巴細胞均明顯減少,CD8+淋巴細胞增加,組間有明顯差異(P＜0.01或P＜0.05),并與輻射劑量有一定的效應關系,同時CD4+/CD8+比值呈明顯下降趨勢,組間差異明顯(P＜0

7、.01);SPF級大鼠在電離輻射后外周血T淋巴細胞總數(shù)、CD4+和CD8+淋巴細胞亞群在電離輻射后無明顯下降,CD4+/CD8+比值隨劑量雖有下降,但下降趨勢比較普通大鼠程度較輕,統(tǒng)計學組間分析無明顯差異。⑤等級相關分析提示SPF級大鼠咽鼓管ICAM-1的表達與外周血CD4+、CD8+和CD4+/CD8+比例無明顯相關關系。而CV級大鼠咽鼓管ICAM-1的表達與CD4+、CD4+/CD8+呈現(xiàn)負相關,與CD8+有正相關關系。