TTF-1和Gli1在肺癌組織中表達(dá)及臨床病理學(xué)意義.pdf

1、目的：
　　本文采用免疫組織化學(xué)方法檢測TTF-1和GLI1在肺癌中表達(dá)，探討其表達(dá)在診斷原發(fā)性肺癌中的價值及臨床病理學(xué)意義。
　　材料和方法：
　　1.材料
　　收集2008年1月至2010年12月中國醫(yī)大一院及我院具有完整臨床資料的原發(fā)性肺癌手術(shù)切除標(biāo)本56例，術(shù)后病理診斷均為腺癌。TTF-1和Gli1羊抗兔多克隆抗體購自美國Santa Cruz公司。SP法免疫組織化學(xué)試劑盒、DAB顯色液購自福州邁新公司。<

2、br>　　2.方法
　　采用免疫組織化學(xué)SP法:所有組織標(biāo)本均經(jīng)10％福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片，以二甲苯脫蠟、梯度乙醇水化。3％過氧化氫室溫15min去除內(nèi)源性過氧化酶。pH7.4的PBS清洗后，置于pH6.0的檸檬酸緩沖液121℃高壓熱抗原修復(fù)2min，自然冷卻后，PBS清洗。滴加山羊血清，室溫封閉20min。滴加一抗（TTF-11∶200;Gli11∶100），4℃孵育過夜。次日室溫放置30min后，PBS

3、清洗，滴加兔二抗，37℃10min。PBS清洗，滴加鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶，37℃10min。DAB顯色，蘇木素復(fù)染，鹽酸酒精分化后常規(guī)脫水、透明，封片后于光學(xué)顯微鏡下觀察結(jié)果。
　　3.陽性結(jié)果判定
　　免疫組織化學(xué)染色，陽性表達(dá)為棕黃色。TTF-1細(xì)胞核表達(dá)，GLI1細(xì)胞漿及細(xì)胞核表達(dá)。每張切片400倍顯微鏡下隨機(jī)選取5個視野，根據(jù)計(jì)算5個視野陽性細(xì)胞數(shù)平均百分?jǐn)?shù)(％)及染色強(qiáng)度（+/-）。染色強(qiáng)度陽性為2分，陰

4、性為0分。由兩位病理學(xué)專家獨(dú)立判定，結(jié)果取二者平均值。綜合評分指數(shù)M=染色強(qiáng)度分A*陽性細(xì)胞數(shù)百分?jǐn)?shù)B;M＜0.5為（-）;0.5《M＜1為(+);1《M＜1.5為(++);M》1.5為(+++)。
　　4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，TTF-1和GLI1蛋白表達(dá)水平與患者臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系及相關(guān)性研究均采用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.TTF-1和GLI1在肺癌

5、組織中表達(dá)
　　TTF-1在肺癌中呈胞核表達(dá)（圖1AB），56例肺癌組織中有44例呈高表達(dá)。Gli1蛋白在肺腺癌組織中呈胞核和胞漿表達(dá)（圖1CD），56例肺癌組織中有36例呈高表達(dá)（表1）。
　　2.TTF-1和GLI1蛋白表達(dá)與肺癌患者臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系
　　通過卡方檢驗(yàn)，TTF-1和Gli1蛋白表達(dá)均與肺癌患者淋巴結(jié)相關(guān)（P＜0.05)，但與年齡、性別及分化程度無明顯相關(guān)性（表1）。
　　表1:TTF-1和

6、Gli1表達(dá)與肺癌患者臨床病理學(xué)參數(shù)關(guān)系
　　參數(shù)TTF-1表達(dá)Gli1表達(dá)┏━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓┃參數(shù)TTF-1表達(dá)Gli1表達(dá)┃┣━━━━━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━━━━━┳━━━━┳━━━━━━━┳━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫┃低(％)┃高(％）X2┃P┃低(％)┃高(％）X2

7、P┃┣━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫┃12/56(21.4％)┃44/56(78.6％)┃┃20/56(35.7％)┃36/56(64.3％)┃┣━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫┃≥608/56(14.3％)┃26/56(46.4％)

8、0.22┃0.634┃14/56(25％)┃1.12┃┃┃┃┃┃20/56(35.7％)0.289┃┣━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫┃年齡┃┃┃┃┃┣━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫┃＜604/56(7.1％)┃18/56(32.1％

9、)┃┃6/56(10.7％)┃16/56(28.6％)┃┣━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫┃男7/56(12.5％)┃0.13┃┃┃0.02┃┃┃23/56(41.1％)┃0.709┃11/56(19.6％)┃19/56(33.9％)0.873┃┣━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━╋━━━━

10、━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫┃性別┃┃┃┃┃┣━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫┃女5/56(8.9％)┃21/56(37.5％)┃┃9/56(16.1％)┃17/56(30.3％)┃┣━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫┃高

11、分3/56(5.4％)┃0.54┃┃┃1.10┃┃┃16/56(28.6％)┃0.461┃5/56(8.9％)┃14/56(25％)0.293┃┣━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫┃分化中低┃┃┃┃┃┣━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫┃9

12、/56(16.1％)┃28/56(50％)┃┃15/56(26.8％)┃22/56(39.3％)┃┣━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫┃N04/56(7.1％)┃34/56(60.7％)8.34┃0.004┃17/56(30.4％)┃4.19┃┃淋巴結(jié)┃6┃┃┃21/56(37.53％)20.041┃┃轉(zhuǎn)移N18/56(14.3％)┃10

13、/56(17.9％)┃┃3/56(5.4％)┃15/56(26.8％)┃┗━━━━━━━━━━━━━┻━━━━━━━━━━━━━┻━━━━┻━━━━━━━┻━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┛
　　3.TTF-1和GLI1蛋白表達(dá)相關(guān)性
　　TTF-1和Gli1在肺癌中表達(dá)無明顯相關(guān)性（x2=1.358，P=0.244）。
　　討論：
　　目前通過免疫組化研究發(fā)現(xiàn)，TTF-1在大多數(shù)肺小細(xì)胞癌、原

14、發(fā)性和轉(zhuǎn)移性肺腺癌、少部分大細(xì)胞未分化肺癌、大多數(shù)非典型神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤呈陽性表達(dá)。本研究發(fā)現(xiàn)，TTF-1在原發(fā)性肺腺癌廣泛表達(dá)，此結(jié)果與文獻(xiàn)報道基本一致。由此看來，TTF-1可用于肺原發(fā)腺癌的診斷。此外，TTF-1在有腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例中，當(dāng)原發(fā)病灶隱匿，而出現(xiàn)淋巴結(jié)內(nèi)腺癌轉(zhuǎn)移時，TTF-1也有助于判斷淋巴結(jié)內(nèi)腺癌的組織來源。
　　Gli1與Hedgehog信號通路中下游基因的特定序列結(jié)合，是整個Hh信號通路中最關(guān)鍵的信號分子，其

15、表達(dá)上調(diào)會引起目的基因的轉(zhuǎn)錄激活，通過調(diào)控Hedgehog信號通路目的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增殖、分化、轉(zhuǎn)移的多種分子基因轉(zhuǎn)錄水平，最終影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展。在人基底細(xì)胞癌及髓母細(xì)胞瘤中存在Gli1的過度表達(dá)，通過Gli1siRNA干擾可明顯抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)其凋亡。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)Gli1在肺腺癌中廣泛表達(dá)，并與肺癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。國內(nèi)研究同樣發(fā)現(xiàn)，Gli1在乳腺癌、肝癌、胃癌及大腸癌中表達(dá)明顯高于癌旁組織，并與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相

16、關(guān)。提示Gli1在腫瘤發(fā)生及轉(zhuǎn)移中可能起著重要作用。
　　TTF-1和Gli1在肺腺癌中表達(dá)上調(diào)，并與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，但兩者之間并沒有明顯相關(guān)性。至今還沒有TTF-1和Gli1在肺癌中表達(dá)相關(guān)性研究，筆者認(rèn)為TTF-1和Gli1可能獨(dú)立影響肺癌的發(fā)生發(fā)展。后期我們將通過加大樣本量進(jìn)一步明確TTF-1和Gli1在肺癌中表達(dá)的關(guān)系。
　　綜上所述，TTF-1和Gli1在肺癌中表達(dá)上調(diào)，TTF-1和Gli1均與肺癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)