血小板反應(yīng)蛋白1在脊髓神經(jīng)元突觸形成中的作用.pdf

1、目的:
　　通過建立體外細(xì)胞培養(yǎng)體系，比較血小板反應(yīng)蛋白1(thrombospondin1，TSP1)和星形膠質(zhì)細(xì)胞(astrocytes，ASTs)對(duì)脊髓神經(jīng)元突觸形成的影響，探討TSP1調(diào)節(jié)體外脊髓神經(jīng)元突觸形成的作用，為進(jìn)一步在體研究調(diào)控脊髓神經(jīng)突觸的建立和重塑提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　體外分離培養(yǎng)新生大鼠的脊髓神經(jīng)元和大腦皮層ASTs，并作純化和鑒定。建立不同的脊髓神經(jīng)元培養(yǎng)體系，即A組:單純體外培養(yǎng)的脊

2、髓神經(jīng)元;B組:加入TSP1培養(yǎng)的脊髓神經(jīng)元;C組:脊髓神經(jīng)元與ASTs通過Transwell系統(tǒng)共培養(yǎng)。通過免疫細(xì)胞化學(xué)定量分析突觸前膜的突觸蛋白1(Synapsin1)和突觸后膜的突觸后致密物蛋白質(zhì)95(postsynaptic density protein95，PSD-95)，分析各組突觸結(jié)構(gòu)的形成情況。通過對(duì)突觸小泡的FM1-43染色，檢測(cè)突觸前膜功能性小泡的循環(huán)情況，判斷突觸前膜的功能。通過免疫細(xì)胞化學(xué)測(cè)定突觸AMPA受體(

3、AMPA receptors，AMPARs)亞基GluR1和NMDA受體(NMDA receptors，NMDARs)亞基NR1，初步判斷突觸后膜的功能。
　　結(jié)果:
　　分離、純化、培養(yǎng)的脊髓神經(jīng)元和ASTs純度分別達(dá)到83％和91％。TSP1和ASTs均能增加脊髓神經(jīng)元突觸后膜特異性蛋白PSD-95、突觸前膜特異性蛋白Synapsin1以及兩者共定位點(diǎn)的密度，兩者促進(jìn)突觸形成的作用沒有明顯的差異性。TSP1和ASTs均能

4、增加FM1-43標(biāo)記的突觸小泡的數(shù)量，兩者之間沒有明顯的差別。TSP1誘導(dǎo)的突觸AMPA受體亞基GluR1的密度較對(duì)照組沒有明顯變化，但是可以增加NMDA受體亞基NR1的密度，這與通過Transwell系統(tǒng)與ASTs共培養(yǎng)突觸形成的作用相似。
　　結(jié)論:
　　分離培養(yǎng)的脊髓神經(jīng)元和ASTs符合實(shí)驗(yàn)的要求。TSP1和ASTs均能促進(jìn)脊髓神經(jīng)元結(jié)構(gòu)性突觸的形成，并能增加突觸前膜囊泡的胞吞和胞吐作用，兩者之間沒有明顯的區(qū)別;TSP