大鼠離斷肢體保存的實驗研究.pdf

1、目的:延長離斷肢體活性保存時間,延緩組織變性,減輕離體組織的缺血損害,為平戰(zhàn)時后方離體復合組織再植手術創(chuàng)造條件,進而為重要復合組織移植成活和功能恢復奠定實驗基礎和臨床經驗。
　　方法:選健康成年Wistar大鼠(雄性)32只,(體重300—400g),大鼠由解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院實驗動物中心提供。實驗一:隨機選出4只,分為2組,共形成8支離斷肢體模型。第一組采用UW液灌注至灌出液清亮為止。第二組為對照組,不做特殊處理。兩組均置于

2、4℃冰箱內低溫保存24小時,肢體離斷后每間隔6小時取組織塊行病理檢查。實驗二:隨機選出16只大鼠分為4組,每組4只,共形成32支離斷肢體模型,第一組為UW液持續(xù)灌注組;第二組為HTK液持續(xù)灌注組。第三組為林格氏液+地塞米松+低分子肝素鈉復合灌注液持續(xù)灌注組。第四組為生理鹽水持續(xù)灌注組作為對照組。離斷肢體在4℃冰箱內保存并以12ml/h進行24小時持續(xù)灌注,進行大體組織觀察。收集不同時間段的灌注流出液進行ALP、ALT、GLU生化檢測,并

3、使用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學分析。同時在離體12小時、24小時取病理標本,行HE染色觀察其組織結構變化,透射電鏡檢查觀察其細胞超微結構的變化。實驗三:隨機選出4只大鼠,形成離斷肢體模型后,采用UW液在4℃冰箱內進行間斷灌注,取材及檢測方法同實驗二,與UW液持續(xù)灌注組在生化指標、組織結構及超微結構方面進行觀察比較。實驗四:選取4只大鼠,離斷肢體后在低溫下間斷灌注無糖DMEM細胞培養(yǎng)液,取材及檢測方法同上,與UW液間斷灌注組進行生化指

4、標、組織結構及超微結構比較。
　　結果:實驗一:在相同時間點,灌注組與對照組相比,肌纖維水腫程度輕,斷裂減少,細胞發(fā)生橫紋溶解減少。實驗二:不同灌注液對大鼠離斷肢體模型進行24小時持續(xù)灌注,灌注組與對照組在相同時間點比較,肌纖維水腫程度輕,斷裂減少,細胞發(fā)生橫紋溶解減少;線粒體腫脹程度輕,空泡化現象及發(fā)生破裂的數量減少,肌原纖維排列整齊,間隙增寬不明顯。各灌注組與對照組在生化指標上存在統(tǒng)計學差異,在相同時間點,灌注組ALT、ALP

5、含量低,GLU含量高。UW液灌注組與HTK液及復合灌注液灌注組相比較,發(fā)生肌纖維水腫程度輕,斷裂減少,細胞發(fā)生橫紋溶解減少;線粒體腫脹程度輕,空泡化現象及發(fā)生破裂的數量減少,肌原纖維排列整齊,間隙增寬不明顯;三組之間生化指標無統(tǒng)計學差異。實驗三:UW液通過不同灌注方式對大鼠離斷肢體模型進行灌注,持續(xù)灌注組與間斷灌注組相比較,病理及超微結構改變程度相當,兩組之間生化指標無統(tǒng)計學差異。實驗四:使用無糖DMEM細胞培養(yǎng)液對大鼠離斷肢體模型進行

6、灌注,肢體腫脹嚴重。UW液間斷灌注組與無糖DMEM細胞培養(yǎng)液間斷灌注組在相同時間點比較,肌纖維水腫程度輕,斷裂減少,細胞發(fā)生橫紋溶解減少。線粒體腫脹程度輕,空泡化現象及發(fā)生破裂的數量減少,肌原纖維排列整齊,間隙增寬不明顯。兩組之間生化指標存在統(tǒng)計學差異。在相同時間點,UW液灌注組ALT、ALP含量低,GLU含量高。
　　結論:1、與單純低溫保存相比,對離斷肢體進行灌注后低溫保存效果更好。2、不同灌注液中,使用UW液灌注,可以使離斷