褐飛虱內(nèi)共生菌Arsenophonus對黃綠綠僵菌毒力的影響及作用機(jī)制.pdf

1、褐飛虱Nilqparvata lugens(St(a)l)是我國水稻上的主要害蟲，黃綠綠僵菌是其重要的病原真菌。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)，褐飛虱內(nèi)生共生菌Arsenophonus可抑制黃綠綠僵菌對褐飛虱的毒力。已有研究表明，影響黃綠綠僵菌毒力的因素較多，除病原菌自身毒力外，還有環(huán)境溫度、菌株保存方法等因素。此外，水稻品種抗性不利于宿主昆蟲——褐飛虱的生長發(fā)育，是否進(jìn)而影響黃綠綠僵菌對褐飛虱的毒力也值得關(guān)注。為此，本研究在篩選黃綠綠僵菌菌株和

2、探索其保存方法的基礎(chǔ)上，就共生菌Arsenophonus對黃綠綠僵菌毒力的影響及其與環(huán)境溫度、水稻品種的關(guān)系進(jìn)行了研究，并通過褐飛虱體內(nèi)血細(xì)胞類型與數(shù)量的觀察初步探討了共生菌Arsenophonus影響黃綠綠僵菌毒力的機(jī)制。
　　1、黃綠綠僵菌菌株的分離鑒定、毒力測定及保存方法比較:從田間病蟲分離到一株褐飛虱黃綠綠僵菌菌株，利用ITS4/ITS5進(jìn)行基因的克隆、測序和序列比對，從而確定該菌株與黃綠綠僵菌ARSEF1764相關(guān)序列的

3、相似性為99％，可確定為ARSEF1764菌株。該菌株對褐飛虱有較強(qiáng)的毒力，處理后9d的褐飛虱發(fā)病率達(dá)73.5％。比較了濾紙片法和PDA平板法對黃綠綠僵菌的保存效果，發(fā)現(xiàn)采用兩種方法保存的F4代菌株對禍飛虱的毒力有明顯差異，褐飛虱噴菌處理后7d發(fā)病率分別為63％和23％，表明濾紙片法的保存效果明顯較好。
　　2、Arsenophonus對黃綠綠僵菌毒力的影響及其與水稻品種和溫度的關(guān)系:噴施黃綠綠僵菌孢子懸浮液后，不同水稻品種上黃綠

4、綠僵菌發(fā)病率均以含Arsenophonus的褐飛虱(下文簡稱BPH++)較低，而不同溫度下的黃綠綠僵菌發(fā)病率則僅在25℃、27℃和29℃時(shí)于噴菌后第3d和5d時(shí)BPH++的發(fā)病率顯著較低，其它溫度下無顯著差異。雙因素方差分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Arsenophonus與水稻品種雙因素試驗(yàn)中均以BPH++黃綠綠僵菌的發(fā)病率顯著較低，而Arsenophonus與溫度雙因素試驗(yàn)中僅在噴菌處理后第3d、5d以BPH++黃綠綠僵菌的發(fā)病率顯著較低。溫度顯著

5、影響褐飛虱的發(fā)病率，23℃～29℃為黃綠綠僵菌侵染褐飛虱的適溫范圍，其中27℃時(shí)最為適宜;31℃和21℃條件時(shí)黃綠綠僵菌對褐飛虱毒力相對較弱。溫度還影響B(tài)PH++與 BPH--（不含Arsenophonus）試蟲LT50的相對大小，其中27℃、29℃時(shí)BPH++試蟲的LT50長于BPH--，在其它溫度條件下則相同甚至較短。由上可知:共生菌Arsenophonus顯著抑制黃綠綠僵菌對褐飛虱的毒力，且該作用受到溫度的顯著影響;溫度亦顯著影響

6、黃綠綠僵菌對褐飛虱的毒力，而水稻品種以及Arsenophonus和水稻品種間、Arsenophonus和環(huán)境溫度間的交互作用均無顯著影響。
　　3、Arsenophonus對黃綠綠僵菌處理的褐飛虱血細(xì)胞的影響:明確褐飛虱的3種血細(xì)胞種類，即漿血胞、粒血胞和脂血胞.其中漿血胞最多，粒血胞次之，脂血胞最少。BPH++、BPH--試蟲的血細(xì)胞構(gòu)成種類一致，褐飛虱體內(nèi)3種血細(xì)胞數(shù)量均以漿血胞最多，粒血胞次之，脂血胞最少。黃綠綠僵菌處理后不

7、同時(shí)間，不同血細(xì)胞數(shù)量的變化規(guī)律明顯不同,其中，漿細(xì)胞數(shù)量在噴菌處理后1～5 d的褐飛虱體內(nèi)顯著升高，且BPH++試蟲高于BPH--試蟲，并在第2d兩者之間差異極顯著;粒細(xì)胞和脂細(xì)胞數(shù)量則僅在黃綠綠僵菌處理初期有顯著差異，且第0d和1 d BPH--試蟲顯著高于BPH++試蟲。推測漿細(xì)胞在渴飛虱應(yīng)對黃綠綠僵菌感染過程中有重要作用，且Arsenophonus能進(jìn)一步激發(fā)該作用;粒細(xì)胞和脂細(xì)胞的作用較不明顯。
　　綜上所述，本文分離獲