Melphalan聯(lián)合腫瘤特異性的CD4+T細(xì)胞過繼治療獲得更強(qiáng)的抗腫瘤效應(yīng).pdf

1、目的：化療是許多惡性腫瘤的主要治療方法之一。化療藥物雖然通過各種不同的機(jī)制作用發(fā)揮抗腫瘤作用，但它們長(zhǎng)期以來被認(rèn)為是抑制機(jī)體的免疫應(yīng)答。近年來的研究表明許多抗腫瘤藥物具有調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的作用，這為化療和免疫治療聯(lián)合應(yīng)用提供了理論支持。目前腫瘤的免疫治療已成為繼外科手術(shù)、放療、化療之后第四類已被證明具有顯著臨床治療效果及優(yōu)勢(shì)的抗腫瘤療法。CTX與過繼細(xì)胞治療（ACT)聯(lián)合治療時(shí)能顯著增強(qiáng)CD4+T細(xì)胞的抗腫瘤免疫應(yīng)答作用并能引起小鼠已建立的

2、腫瘤消退。本研究擬通過對(duì)一些常用化療藥物的篩查來開發(fā)更多的具有類似CTX作用的化療藥物，并探討其作用機(jī)理，從而為臨床上設(shè)計(jì)和完成更有效的化療聯(lián)合免疫治療提供新的思路和理論依據(jù)。
　　方法：用動(dòng)物模型試驗(yàn)，將苯丁酸氮芥、替莫唑胺、卡莫司汀、紫杉醇、吉西他濱、阿霉素和馬法蘭等化療藥物分別與能特異性識(shí)別腫瘤的CD4+T細(xì)胞過繼治療聯(lián)合應(yīng)用，通過流式細(xì)胞術(shù)來篩選出能增強(qiáng)腫瘤特異性的CD4+T細(xì)胞抗腫瘤免疫應(yīng)答的化療藥物。然后通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分

3、析篩選出的藥物對(duì)腫瘤微環(huán)境中各種不同的免疫細(xì)胞和細(xì)胞因子的影響；分析其對(duì)內(nèi)源性T淋巴細(xì)胞的效應(yīng)；通過體外培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞分析該篩選出的藥物是否能引起CRT的膜轉(zhuǎn)位和釋放HMGB1至胞外；觀察在不同的動(dòng)物模型中篩選出的藥物聯(lián)合CD4+T細(xì)胞過繼治療的療效。
　　結(jié)果：通過對(duì)幾種常用化療藥物苯丁酸氮芥、替莫唑胺、卡莫司汀、紫杉醇、吉西他濱、阿霉素和馬法蘭等的篩查，發(fā)現(xiàn)僅Melphalan和 CTX—樣能有效逆轉(zhuǎn)這種變異的CD4+T細(xì)胞應(yīng)答

4、，促進(jìn)腫瘤特異性的CD4+T細(xì)胞大量擴(kuò)增和向有利的效應(yīng)細(xì)胞分化。Melphalan能引起腫瘤微環(huán)境中免疫細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化，可引起一過性的淋巴細(xì)胞缺乏。通過對(duì)細(xì)胞因子的分析，發(fā)現(xiàn)Melphalan可誘導(dǎo)產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子的微環(huán)境。此外，Melphalan還能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生CRT的膜轉(zhuǎn)位和釋放HMGB1，即能使腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫原性細(xì)胞死亡。Melphalan還能激活宿主內(nèi)源性CD8+T細(xì)胞。在A20HA和CT26HA兩種皮下種植瘤小鼠模型中，